運動損傷以及骨關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致的關(guān)節(jié)軟骨缺損、退變已嚴(yán)重影響運動成績和生活質(zhì)量，而修復(fù)、重建缺損的關(guān)節(jié)軟骨一直是困擾創(chuàng)傷骨科和矯形外科的難題。近年來，組織工程學(xué)發(fā)展，使體外構(gòu)建組織工程化軟骨成為可能，為修復(fù)、重建關(guān)節(jié)軟骨缺損開辟了新途徑。由于關(guān)節(jié)軟骨組織在體內(nèi)所處的力學(xué)環(huán)境對其生長、發(fā)育和功能的維持有著重要的作用，因此，尋找最優(yōu)的體外培養(yǎng)環(huán)境來提高工程化軟骨的質(zhì)量，使其更接近于天然軟骨，成為目前研究的熱點。目的：本實驗通過利用旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)儀進(jìn)行軟骨細(xì)胞模擬微重力培養(yǎng)，觀察模擬微重力對軟骨細(xì)胞．改良纖維蛋白膠支架復(fù)合物構(gòu)建的影響，為更好修復(fù)、重建關(guān)節(jié)軟骨缺損提供實驗依據(jù)。 方法：1．取3周齡新西蘭白兔膝關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行單層培養(yǎng)擴(kuò)增，收集4代以內(nèi)的軟骨細(xì)胞作為種子細(xì)胞。2．在纖維蛋白膠中加入適宜比例的纖溶酶抑制劑（抑肽酶、氨甲環(huán)酸）制備改良纖維蛋白膠支架。3．將種子細(xì)胞以1x10~6／ml密度接種于支架內(nèi)，構(gòu)建軟骨細(xì)胞．改良纖維蛋白膠支架復(fù)合物。4．將復(fù)合物分成兩組：旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)組和靜態(tài)對照組。旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)組利用旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)儀進(jìn)行模擬微重力培養(yǎng)；靜態(tài)對照組在12孔板中靜止培養(yǎng)，均連續(xù)培養(yǎng)3周。5．在3周內(nèi)，每... 

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
1 前言(INTRODUCTION)
2 研究依據(jù)(RESEARCH EVIDENCE)
    2.1 組織工程學(xué)技術(shù)概述
    2.2 軟骨細(xì)胞體外分離和培養(yǎng)技術(shù)
    2.3 支架材料
        2.3.1 支架材料的選擇
        2.3.2 纖維蛋白膠支架
        2.3.3 改良纖維蛋白膠支架
    2.4 培養(yǎng)模式
        2.4.1 微重力反應(yīng)器的設(shè)計開發(fā)及其結(jié)構(gòu)、原理
        2.4.2 微重力反應(yīng)器的應(yīng)用
3 研究目的和意義(INTENTION AND SIGNIFICANCE)
4 研究的創(chuàng)新之處(RESEARCH INNOVATION)
5 實驗設(shè)計與結(jié)果(EXPERIMENT DESIGN AND RESULTS)
    5.1 實驗材料(MATERIALS)
        5.1.1 主要實驗儀器設(shè)備
        5.1.2 主要試劑
    5.2 實驗方法(METHODS)
        5.2.1 試劑配制
        5.2.2 軟骨細(xì)胞消化分離與體外培養(yǎng)
        5.2.3 軟骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞-纖維蛋白膠復(fù)合物體外培養(yǎng)觀測指標(biāo)
    5.3 實驗結(jié)果(RESULTS)
        5.3.1 復(fù)合物大體觀察及濕重測量
        5.3.2 組織形態(tài)學(xué)觀察:
            5.3.2.1 單層軟骨細(xì)胞體外傳代培養(yǎng)倒置顯微鏡觀察
            5.3.2.2分組復(fù)合物中軟骨細(xì)胞生長狀況:
        5.3.3 生化檢測
6 討論(DISCUSSION)
    6.1 細(xì)胞-支架復(fù)合物建立
    6.2 靜態(tài)、動態(tài)兩種培養(yǎng)模式的比較
        6.2.1 旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)對復(fù)合物的組織形態(tài)學(xué)影響
        6.2.2 旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)對復(fù)合物生理功能的影響
    6.3 改良纖維蛋白膠作為軟骨細(xì)胞旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)支架的適用性
    6.4 旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)對復(fù)合物影響的機(jī)制探討
7 結(jié)論(CONCLUSION)
8 實驗難點(EXPERIMENT DIFFICULTIES)
9 實驗建議和展望(ADVICE AND PROSPECT)
參考文獻(xiàn)(REFERENCES)
致謝(ACKNOWLEDGEMENTS)
附頁(APPENDIX)
文獻(xiàn)綜述(REVIEW)



本文編號：3662895