本文關(guān)鍵詞：凝溶膠蛋白在急性放射性肺損傷中的作用及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 給予單次大劑量X射線照射小鼠胸部，探究凝溶膠蛋白（Gelsolin，GSN）在血漿和肺組織中的表達(dá)變化，了解GSN與急性放射性肺損傷之間的關(guān)系；構(gòu)建高、低表達(dá)GSN的小鼠模型，檢測血漿中自由基、炎癥因子，探討GSN是否對急性放射性肺損傷具有保護(hù)作用及其機制。 方法 1.20Gy X線單次胸部照射Balb/c小鼠，建立小鼠急性放射性肺損傷模型。采用免疫組化法觀察GSN在肺組織中的表達(dá)；在照射后6、12、24、48、72、96、120h不同時間點取小鼠血漿、肺泡灌注液（BALF）及肺組織樣本，用ELISA法、Western Blot法及RT-PCR法檢測GSN在血漿、BALF及肺組織的表達(dá)變化。 2.給予Balb/c小鼠尾靜脈注射20μg抗凝溶膠蛋白抗體（anti-GSN antibodies），構(gòu)建循環(huán)中GSN低表達(dá)的小鼠模型。隨后30min內(nèi)20Gy X線單次照射小鼠胸部，分為：單純照射組（none）、照射+IgG組（IgG）和照射+anti-GSN抗體組（anti-GSN）。在未照射和照射后12、24、48、72h及30d不同時間點取小鼠血漿、BALF及肺組織樣本，分別測定BALF中白細(xì)胞數(shù)及總蛋白濃度，并將離心BALF后得到的沉淀進(jìn)行涂片和瑞氏-吉姆薩染色；光鏡觀察并比較肺組織病理學(xué)改變；用WST-1法和TBA法分別測定血漿、BALF中的SOD活力和MDA含量。 3.給予Balb/c小鼠氣管內(nèi)滴注60μl慢病毒，構(gòu)建肺組織GSN高表達(dá)的小鼠模型。首先成功構(gòu)建介導(dǎo)GSN基因表達(dá)的重組慢病毒（Lenti-GSN），隨后給予小鼠氣管內(nèi)滴注，10天后采用16Gy X線單次照射小鼠胸部，分為：照射+生理鹽水組（saline）、照射+Lenti-GFP組（Lenti-GFP）及照射+Lenti-GSN組（Lenti-GSN）。每天稱小鼠體重，在未照射（0d）和照射后1、15、30及60d不同時間點取小鼠血漿、BALF及肺組織樣本。用ELISA和Western Blot法驗證血漿和肺組織中GSN的表達(dá)水平。測定BALF中白細(xì)胞數(shù)及總蛋白含量和肺組織中MPO活力；光鏡下觀察肺組織病理切片；用WST-1法和TBA法分別測定血漿中SOD活力和MDA含量；用ELISA法測定血漿中TNF-α和IL-6的含量。 結(jié)果 1.免疫組化顯示GSN廣泛分布于肺組織上皮細(xì)胞。20Gy X線胸部單次照射小鼠，血漿中GSN水平在照后6-72h持續(xù)下降，隨后逐漸上升，在照后120h恢復(fù)到正常水平。BALF中GSN水平則隨著照后時間的延長逐漸升高，在照后96h及120h高于正常水平（P0.05）。肺組織中GSN mRNA和蛋白表達(dá)在照后24h低于正常水平，但在照后48-96h高于正常值。 2. anti-GSN組各時間點BALF中白細(xì)胞數(shù)、總蛋白濃度均明顯高于none組和IgG組（P0.05或P0.01）；肺組織HE染色顯示，與IgG對照組比較，，anti-GSN組肺血管充血、出血、水腫及炎癥細(xì)胞浸潤明顯，肺間隔增厚，肺泡腔萎縮，放射肺損傷加重。照后3d none組和IgG組血漿及BALF中SOD活力顯著高于anti-GSN組（P0.05），MDA含量明顯低于anti-GSN組（P0.05）。 3.成功構(gòu)建介導(dǎo)GSN基因表達(dá)的重組慢病毒（Lenti-GSN）。氣管滴注后10天，Western Blot示Lenti-GSN組肺組織表達(dá)Flag標(biāo)簽蛋白，Lenti-GFP組和saline組未表達(dá)；Lenti-GSN組小鼠肺組織GSN含量高于Lenti-GFP組（P0.05），血漿中GSN含量為170.648±18.291mg/l，與Lenti-GFP組（184.721±15.427mg/l）無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）；但照后1d Lenti-GSN組小鼠肺組織GSN含量低于Lenti-GFP組（P0.05），血漿中GSN含量為144.305±6.047mg/l，顯著高于Lenti-GFP組（48.161±6.895mg/l）（P0.01）。照后21d至照后60d，Lenti-GSN組小鼠體重明顯高于對照組（P0.05）。Lenti-GSN組在照后15d及30d肺組織MPO活力、BALF中白細(xì)胞數(shù)及總蛋白濃度均明顯低于Lenti-GFP組（P0.05或P0.01）。肺組織病理切片顯示，與Lenti-GSN組比較，Lenti-GFP組肺組織充血、水腫、肺間隔增厚明顯，放射肺損傷加重。照后15d Lenti-GSN組血漿中SOD活力高于Lenti-GFP組（P0.05），MDA含量低于Lenti-GFP組（P0.05）。照后60d Lenti-GSN組血漿中TNF-α、IL-6含量明顯低于Lenti-GFP組（P0.01）。 結(jié)論 1.20Gy X線單次照射小鼠胸部，成功建立小鼠急性放射性肺損傷模型。證明了血漿、BALF及肺組織中GSN表達(dá)變化與照后時間有相關(guān)性。 2.循環(huán)中GSN低表達(dá)加劇肺組織炎癥反應(yīng)，增加肺血管通透性，加劇輻射誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷；其損傷加重與機體清除自由基能力降低有關(guān)。 3.肺組織GSN高表達(dá)減輕肺組織炎癥反應(yīng)，降低肺血管通透性，減輕輻射誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷；其損傷減輕與機體清除自由基、炎癥因子能力增強有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：GSN 急性放射 肺損傷
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R818
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 引言11-13
• 第一部分：GSN 表達(dá)量與急性放射性肺損傷之間的關(guān)系13-29
• （一） 材料和儀器13-16
• （二） 實驗方法16-25
• （1）Balb/c 小鼠急性放射性肺損傷時，血漿 pGSN 和右肺 BALF 中 GSN 濃度檢測16-19
• （2）Balb/c 小鼠急性放射性肺損傷時，肺組織 cGSN 蛋白和 mRNA 表達(dá)量檢測19-25
• （三） 實驗結(jié)果25-27
• （四） 討論27-29
• 第二部分：GSN 在急性放射性肺損傷中的作用及其機制研究29-64
• 一、 構(gòu)建低表達(dá) GSN 的小鼠模型，探討 GSN 在急性放射性肺損傷中的作用及其機制29-39
• （一） 材料和儀器29-30
• （二） 實驗方法30-34
• （三） 實驗結(jié)果34-37
• （四） 討論37-39
• 二、 構(gòu)建高表達(dá) GSN 的小鼠模型，探討 GSN 在急性放射性肺損傷中的作用及其機制39-64
• （一） 材料和儀器39-40
• （二） 實驗方法40-50
• （三） 實驗結(jié)果50-61
• （四） 討論61-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻(xiàn)65-69
• 縮略詞語69-70
• 綜述70-82
• 參考文獻(xiàn)78-82
• 攻讀學(xué)位期間本人公開發(fā)表的論文及科研活動82-83
• 致謝83-84

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王佳;孫頂;程贏;閔銳;;凝溶膠蛋白在急性放射損傷防護(hù)中的作用[J];輻射防護(hù);2010年06期

2 王佳;李雨;李明娟;閔銳;;輻射誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)凝溶膠蛋白變化及其對小鼠氧化損傷的影響[J];輻射研究與輻射工藝學(xué)報;2011年04期

3 倪曉光;王貴齊;白曉楓;劉芳;周蘭萍;趙平;;泛素-蛋白酶體途徑降解胰腺癌細(xì)胞系中凝溶膠蛋白[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2008年06期

  本文關(guān)鍵詞：凝溶膠蛋白在急性放射性肺損傷中的作用及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：357544