背景與目的溴敵�。˙romadiolone），屬第二代香豆素類抗凝血?dú)⑹髣�，因其滅鼠效果好、�?duì)人畜毒性低，近年來在我國(guó)得到認(rèn)同并普遍使用。但由于使用管理不當(dāng)，造成了該類鼠藥中毒、甚至死亡事件的增加。因此，建立快速高效的生物樣品中溴敵隆的檢測(cè)方法十分必要。 樣品前處理是法醫(yī)毒物分析的關(guān)鍵步驟，直接影響毒物的檢出率。傳統(tǒng)的樣品前處理方法如固相萃取、液液萃取等，存在操作繁瑣費(fèi)時(shí)、提取率低、需要使用大量對(duì)人體和環(huán)境有毒害作用的有機(jī)溶劑等問題。分散液相微萃取是由Rezaee等于2006年首次報(bào)道的一種新型樣品前處理方法，該方法集采樣、萃取和濃縮于一體，操作簡(jiǎn)便快速、成本低、富集效率高且環(huán)境友好，是一種很有應(yīng)用前景的樣品前處理技術(shù)。方法本研究將離子液體分散液相微萃取技術(shù)引入生物檢材尿液和血漿中的溴敵隆前處理中，通過考察萃取劑和分散劑體積、樣品pH、鹽濃度、萃取時(shí)間和離心時(shí)間等因素，優(yōu)化前處理?xiàng)l件，獲得較好的前處理結(jié)果。采用HPLC對(duì)前處理樣品進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果選用離子液體1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽（[C_6MIM][PF_6]）為萃取劑，甲醇為分散劑，提取樣品中的溴敵隆。優(yōu)化后的溴敵隆分散液相微萃取操作條件為：萃取劑[C_6MIM][PF_6]50μL，分散劑甲醇100μL，樣品溶液pH值5.0，萃取時(shí)間5min，離心時(shí)間8min。 本研究建立了溴敵隆的高效液相色譜分析方法。方法采用Symmetry C18反相柱分離，流動(dòng)相由甲醇（A）、25mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH=3.0）（B）組成，等度洗脫，A+B=85+15（v/v），流量1.0mL/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)260nm。溴敵隆在1.0~500.0μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于5%，方法靈敏度高、重現(xiàn)性佳。 在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，尿液中溴敵隆的檢出限為1.1ng/mL（S/N＞3），線性范圍為0.01~5.0μg/mL，線性相關(guān)系數(shù)r=0.9997。空白樣品中低、中、高濃度加標(biāo)回收率分別為82.4%、93.0%、95.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）分別為6.63%、3.89%、3.86%；血漿中檢出限為1.1ng/mL（S/N＞3），線性范圍為0.01~5.0μg/mL，線性相關(guān)系數(shù)r=0.9988�？瞻讟悠分械汀⒅�、高濃度加標(biāo)回收率分別為76.4%、82.6%、92.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）分別為4.17%、2.99%、1.67%。 結(jié)論方法可滿足中毒樣品分析的需要，已成功應(yīng)用于尿液和血漿中溴敵隆的檢測(cè)，取得了滿意的結(jié)果。
【學(xué)位單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：D919
【部分圖文】：

近年來在我國(guó)得到認(rèn)同并普遍使用。但由于使用管理不當(dāng)、及毒鼠強(qiáng)等劇毒鼠藥的禁止使用，造成了該類鼠藥中毒事件的不斷由于其屬慢性鼠藥，中毒潛伏期較長(zhǎng)，人們發(fā)現(xiàn)時(shí)多已難以檢出。表現(xiàn)為廣泛性多臟器出血，出現(xiàn)腹痛、背痛、惡心、嘔吐、鼻出血皮下出血、關(guān)節(jié)周圍出血、尿血、便血、精神不振、低熱等癥狀。可見活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）、凝血酶原時(shí)間（PT）及其（INR）延長(zhǎng)，嚴(yán)重者發(fā)生休克、昏迷，甚至死亡[5,6]。因此，法作中，建立生物樣品中溴敵隆的快速高效檢測(cè)方法十分必要。敵隆的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)敵�。˙romadiolone）：別名樂萬通，化學(xué)名為 3-[3-(4'-溴聯(lián)苯--苯丙基]-4-羥基香豆素，分子量：527.4，分子式為 C30H23O4Br。純色粉末[7]，熔點(diǎn) 200~210 ℃，微溶于水（19 mg/L，20 ℃）[8]，易醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑。大鼠口服 LD50為 1.1 mg

id micro-extraction，DLLME）技術(shù)。該法是一個(gè)基于正確的微萃取技術(shù)，萃取劑為密度較高的溶劑，如氯仿、四氯；分散劑要能與萃取劑和水相溶液混溶，如甲醇、乙腈、，是一種快速、經(jīng)濟(jì)、回收率高、富集效率高且環(huán)境友好8,39]。方法提出后立即得到了廣泛的應(yīng)用[40-43]，展現(xiàn)了良液相微萃取技術(shù)的原理相微萃取包含兩個(gè)步驟：首先，將適當(dāng)體積的萃取劑和分有目標(biāo)物的水相樣品中，萃取劑立即形成細(xì)小的微滴分散富集。由于分散劑的作用，萃取劑和水相樣品之間接觸面短暫，瞬間達(dá)到平衡。萃取速度快為該方法最大的特點(diǎn)。過離心，分析物進(jìn)入離心管底部沉積相中，用微量注射器析即可。DLLME 步驟如圖 1-2 所示[41]。

司）；TG 328B 電光分析天平（上海天平儀器廠）；F津市科億隆實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；0.45 μm 有機(jī)相針式濾有限公司）。件：Symmetry C18 反相柱（4.6×150 mm，5 μm）；流 mmol/L 磷酸鹽緩沖液（pH=3.0）（B）組成，A+B=85+L/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30 討論長(zhǎng)選擇工作液經(jīng)紫外可見分光光度計(jì)光譜掃描，獲得其紫外吸收。溴敵隆分別在 260 nm 和 207 nm 有最大吸收，為減少雜溴敵隆 HPLC 測(cè)定時(shí)，選用 260 nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)。
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本文編號(hào)：2845143