目的:探討Melusin蛋白對甲基苯丙胺(METH)誘導的心肌細胞凋亡的抵抗作用及作用通路,旨在為吸食METH的戒毒者探討一種心臟功能的保護方法,同時為吸食METH致死的案件法醫(yī)鑒定提供新的檢測指標。方法:⑴建立SD大鼠METH慢性中毒動物模型(染毒組和對照組);建立新生SD大鼠原代心肌細胞METH濃度梯度(0~2.0 mM)、時間梯度(0~48 h)中毒模型和過表達Melusin細胞模型(Mel+/-METH組和NC+/-METH組);根據(jù)納排標準,收集貴州醫(yī)科大學法醫(yī)司法鑒定中心確認吸食METH且無吸食其他任何毒品致死案例為實驗組及對照組案例的人心肌組織。(2)采用蛋白免疫印跡法(Western Blotting,WB)檢測動物和細胞水平中Melusin蛋白、凋亡標志蛋白(cleaved PARP、cleaved caspase-3)及相關調控通路關鍵蛋白(FAK、IQGAP1)和效應蛋白(p-AKT、p-GSK3β、p-ERK)的表達;利用TUNEL染色技術檢測過表達Melusin細胞模型和人體心肌細胞凋亡水平;使用蘇木素-伊紅染色法(hematoxylin and eosin,HE)觀察人體心肌組織的形態(tài)結構變化;運用免疫組織化學染色法(immunohistochemistry,IHC)檢測人體心肌細胞中Melusin的表達。結果:(1)在動物水平上,染毒組與對照組相比,Melusin表達降低,cleaved PARP、cleaved caspase-3表達升高,FAK、IQGAP1、p-AKT、p-GSK3β和p-ERK表達降低,且均具有統(tǒng)計學意義(P0.05);在大鼠原代心肌細胞METH中毒模型上,均隨濃度梯度、時間梯度的遞增,Melusin表達降低,cleaved PARP、cleaved caspase-3表達升高,FAK、IQGAP1、p-AKT、p-GSK3β和p-ERK表達降低,且均具有統(tǒng)計學意義(P0.05);而在經(jīng)過METH處理的過表達Melusin蛋白細胞模型中,蛋白的表達情況得到了逆轉,即Mel+METH組與NC+METH組相比,Melusin蛋白表達升高,PARP、cleaved caspase-3表達降低,FAK、IQGAP1、p-AKT、p-GSK3β和p-ERK表達升高,且均具有統(tǒng)計學意義(P0.05),TUNEL染色也顯示凋亡信號明顯降低(P0.05),細胞存活增加;在人體心肌組織中,HE染色觀察到實驗組與對照組相比,人心肌細胞呈現(xiàn)萎縮、壞死、脂肪浸潤、局灶性出血、心肌纖維斷裂等病理改變,且IHC發(fā)現(xiàn)在心肌細胞胞漿內棕黃色著色的心肌細胞數(shù)量明顯減少,甚至消失,并具有統(tǒng)計學意義(P0.05),TUNEL染色技術顯示實驗組與對照組相比,大量心肌細胞核被染成棕褐色,細胞凋亡率較對照組明顯升高(P0.05)。結論:甲基苯丙胺通過降低Melusin引起心肌細胞凋亡,而過表達Melusin蛋白可以通過提高FAK與IQGAP1,激活AKT/GSK3β與ERK的磷酸化,降低METH誘導的心肌細胞凋亡。
【學位單位】：貴州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：D919.1
【部分圖文】：

圖 1 暴露于 METH 對 Melusin 蛋白表達水平的影響Fig. 1 Effects of METH exposure on the protein expression levels of Melusin注：A, B: SD 大鼠隨機分為對照組和 14 d METH 組(n=6/組)。WB 檢測心肌組織中 Melusin蛋白表達水平。*，與對照組比較 P<0.05(獨立樣本 t 檢驗)。C-F: 大鼠原代心肌細胞分別暴

圖 2 暴露于 METH 對凋亡標志物 cleaved caspase-3、cleaved PARP 蛋白表達水平的影響Fig. 2 Effects of METH exposure on the protein expression levels of apoptotic markerscleaved caspase-3 and cleaved PARP注：A, B: SD 大鼠隨機分為對照組和 14 d METH 組(n=6/組)。WB 檢測心肌組織中 cleaved

圖 3 過表達 Melusin 蛋白對大鼠原代心肌細胞凋亡標志物cleaved PARP 和 cleaved caspase-3 蛋白表達的影響Fig. 3 Effects of overexpression of Melusin protein on the protein expression levels ofapoptosis markers cleaved PARPand cleaved caspase-3
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本文編號：2845043