【摘要】：人體受到核事故輻射以及臨床上接受放射治療后,可引起肺組織損傷,導(dǎo)致放射性肺炎和肺纖維化。根據(jù)判斷終點及影響因素的不同,放射性肺纖維化發(fā)病率報道的波動范圍很大,可以從1%至43%。放射性肺纖維化發(fā)病機制尚未闡明,預(yù)后很差,目前臨床上尚缺乏特異有效的治療藥物。因此,闡明放射性肺纖維的發(fā)病機制對臨床疾病的治療和藥物的開發(fā)具有重要的意義。放射性肺纖維化是放射性肺損傷的晚期改變,可以導(dǎo)致患者呼吸困難甚至嚴(yán)重的呼吸功能不全,其發(fā)病機制復(fù)雜,患者預(yù)后差。目前臨床上缺乏明確的早期診斷和有效的治療方法。因此對放射性肺纖維化機制的研究及防治藥物的研發(fā)一直是臨床亟需解決的問題,也是當(dāng)前的研究熱點。ABT-263作為近年來應(yīng)用于臨床治療腫瘤的藥物,近期發(fā)現(xiàn)具有清除衰老細(xì)胞、改善造血干細(xì)胞輻射損傷的作用。我們課題組預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)ABT-263能夠延長放射性肺纖維化小鼠的生存時間;減輕肺纖維化病變。本研究將在前期研究的基礎(chǔ)上利用局部輻射誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠模型,確認(rèn)ABT-263對衰老AEC Ⅱ的清除作用以及對放射性肺纖維化的治療作用并探討其機制。第一部分肺細(xì)胞衰老在放射性肺纖維化發(fā)生過程中的作用研究建立放射性纖維化模型小鼠,觀察模型小鼠不同時期肺組織中Ⅱ型肺上皮細(xì)胞(airway epithelial cell type Ⅱ,AEC Ⅱ)衰老細(xì)胞的比例和功能,以及模型小鼠肺組織衰老相關(guān)細(xì)胞因子基因表達,闡明AEC Ⅱ衰老與放射性肺纖維化的關(guān)系。健康雄性C57BL/6小鼠隨機分為對照組(Control組)和照射組(IR組),照射組小鼠接受17 Gy右側(cè)胸部局部照射。受照4、8、12、16、23周后取材,檢測不同時間點臟器指數(shù)的變化,觀察受照小鼠皮毛的變化。觀察小鼠肺組織結(jié)構(gòu)的變化、膠原形成和β-半乳糖苷酶表達。免疫熒光檢測其Pro-SPC和P16的表達。基因PCR芯片技術(shù)檢測肺組織纖維化相關(guān)基因的表達。外周血計數(shù)、HSC/HPC、CFU-GM和T細(xì)胞增殖實驗檢測受照不同時間點造血免疫系統(tǒng)功能損傷的變化。研究顯示,17Gy右肺局部照射可以誘導(dǎo)肺纖維化的發(fā)生發(fā)展;小鼠右肺局部照射可顯著增加受照肺組織AECⅡ細(xì)胞中β-Gal染色及P16陽性細(xì)胞的數(shù)量和分布;小鼠右肺局部照射可升高肺組織纖維化相關(guān)基因的表達,炎癥相關(guān)因子第8周明顯,纖維化相關(guān)因子第23周明顯;Tgfbeta第16周達到峰值;Bcl2表達不斷升高,于第23周達到最高;肺局部照射對小鼠造血免疫具有一定的損傷作用。結(jié)果提示衰老細(xì)胞可能成為防治放射性肺纖維化的靶點。第二部分ABT263清除衰老的AEC Ⅱ?qū)Ψ派湫苑卫w維化的治療作用機制研究本研究為確認(rèn)ABT-263對衰老AEC Ⅱ的清除作用以及對放射性肺纖維化的治療作用并探討其機制,將72只健康雄性C57BL/6小鼠分為對照組(Control組)、給藥組(ABT組)、照射組(IR組)和治療組(IR+ABT組)。小鼠接受17Gy右側(cè)胸部X射線照射,于第16周開始灌胃給予ABT-263 50mg/kg,每療程給藥5天,停藥2周,給藥2個療程后進行觀察。停藥后觀察小鼠生存率變化。兩個療程治療后CT檢查小鼠肺實質(zhì)的損傷情況。免疫組化法觀察小鼠肺組織結(jié)構(gòu)的變化、膠原生成和β-半乳糖苷酶表達。免疫熒光檢測肺組織中肺表面活性前體蛋白C和P16的表達。基因PCR芯片技術(shù)檢測肺組織纖維化相關(guān)基因的表達。外周血計數(shù)、骨髓造血干細(xì)胞和造血祖細(xì)胞分型檢測、骨髓細(xì)胞集落形成能力測定和T細(xì)胞增殖實驗檢測受照小鼠造血免疫系統(tǒng)功能的變化。我們的工作首次開展了 ABT263對放射性肺纖維化的實驗治療作用研究,研究發(fā)現(xiàn)ABT263單獨使用可降低放射性肺纖維化小鼠的死亡率;減輕肺纖維化病變程度;對局部照射引起的造血免疫細(xì)胞功能損傷有一定的改善作用。進一步研究發(fā)現(xiàn),ABT263能夠降低Ⅱ型肺上皮細(xì)胞衰老比例,減少肺纖維化相關(guān)通路蛋白表達,抑制Bcl-2表達。本研究結(jié)果提示ABT-263可能通過抑制Bcl-2清除衰老細(xì)胞對放射性肺纖維化起到治療和緩解作用。本項結(jié)果為研發(fā)治療放射性肺纖維化的藥物及新的干預(yù)措施提供新的思路。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R818

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本文編號：2312294