【摘要】：目的：本研究旨在利用脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞（Ad-MSC），評(píng)價(jià)其對(duì)放射性腸損傷的修復(fù)作用。 方法：本研究采用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為成年雄性SD大鼠，SPF級(jí)，體重400~450g，共152只。首先，選擇其中36只大鼠進(jìn)行放射性腸損傷的劑量效應(yīng)關(guān)系研究。將其平均分為4組，每組9只。分別給予0、8.5、12及15Gy的全腹部X射線照射。照射后14d內(nèi)，每2d稱量大鼠體重，計(jì)算占初始體重的百分比；記錄受照大鼠的腹瀉發(fā)生率及便潛血陽(yáng)性率；HE染色分析受照小腸組織形態(tài)的變化；采用One-way ANOVA方法對(duì)組間數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。然后，選擇40只大鼠進(jìn)行了Ad-MSC修復(fù)放射性腸上皮損傷的實(shí)驗(yàn)研究。將大鼠分為3組：健康對(duì)照組（6只）、PBS溶劑對(duì)照組（17只）和Ad-MSC治療組（17只）。全腹照射劑量為15Gy，腹腔移植的Ad-MSC數(shù)量為5×106/只。PBS腹腔注射量為：1.5ml/只。在照射后的第10、20及30d，將PBS溶劑對(duì)照組及Ad-MSC治療組的大鼠分批處死，每組3只。獲取新鮮的腸組織標(biāo)本進(jìn)行上皮完整性的分析，包括：HE染色分析受照腸組織形態(tài)，Ki67免疫組化染色分析隱窩細(xì)胞增殖，TUNEL檢測(cè)受照腸組織凋亡細(xì)胞，Bmi1免疫組化染色分析隱窩Bmi1陽(yáng)性腸干細(xì)胞數(shù)量，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)受照組織內(nèi)EGF、KGF、E-Cadherin、Bax和Bcl-2基因的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)分析各組大鼠體重變化及生存率。然后，再次選擇40只大鼠，采用同樣的分組方法和造模方法進(jìn)行了Ad-MSC修復(fù)損傷血管的實(shí)驗(yàn)研究。在照射后的第10、20及30d，將PBS溶劑對(duì)照組及Ad-MSC治療組的大鼠分批處死，每組3只。免疫熒光染色分析受照部位CD31/vWF雙陽(yáng)性血管內(nèi)皮細(xì)胞的數(shù)量，Isolectin-B4染色分析受照部位脈管系統(tǒng)的密度，，VE-Cadherin免疫組化染色分析受照部位血管結(jié)構(gòu)的完整性。CD31/CD105/CD34/CD45/CD133/Ki67免疫熒光染色分析受照部位血管的新生機(jī)制，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)受照組織內(nèi)VEGF、HGF和SDF-1因子的表達(dá)量。統(tǒng)計(jì)分析各組大鼠的體重及生存率變化。最后選取剩余36只大鼠，進(jìn)行了Ad-MSC的抗炎作用研究。實(shí)驗(yàn)分為3組：健康對(duì)照組（6只）、PBS溶劑對(duì)照組（15只）和Ad-MSC治療組（15只）。造模方法同前。在照射后第3.5、7、10、20和30d，將PBS溶劑對(duì)照組和Ad-MSC治療組大鼠分批處死，每組3只。獲取大鼠外周血及胸腺組織。流式細(xì)胞術(shù)分析樣本中CD4/CD25/Foxp(3)陽(yáng)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的百分比。ELISA方法檢測(cè)外周血IL-10的含量。獲取受損腸組織，Masson染色分析受照腸組織膠原的沉積，MPO免疫組化染色分析炎癥細(xì)胞在損傷部位的浸潤(rùn)。PBS溶劑對(duì)照組及Ad-MSC治療組數(shù)據(jù)采用配對(duì)t檢驗(yàn)來(lái)進(jìn)行比較。 結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)，放射性腸損傷的損傷程度與輻射劑量具有線性依賴關(guān)系。以15Gy劑量引起的病理變化具有典型的放射性腸損傷疾病特征。與PBS溶劑對(duì)照組相比，Ad-MSC能夠上調(diào)損傷部位EGF、KGF和Bcl-2基因的表達(dá)，促進(jìn)隱窩細(xì)胞的增殖；通過(guò)下調(diào)損傷部位Bax基因的表達(dá)，抑制上皮細(xì)胞的凋亡。從而增加了隱窩內(nèi)Bmi1陽(yáng)性腸干細(xì)胞的數(shù)量。另外，Ad-MSC通過(guò)上調(diào)損傷部位VEGF、HGF和SDF-1基因的表達(dá)動(dòng)員骨髓中CD31陽(yáng)性造血干/祖細(xì)胞向損傷部位遷移，促進(jìn)該部位血管的重建。不僅如此，Ad-MSC能夠上調(diào)外周血及胸腺組織內(nèi)的CD4/CD25/Foxp(3)炎性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的百分比，提高外周血中IL-10的含量，減輕受照大鼠體內(nèi)的炎癥反應(yīng)。 結(jié)論：Ad-MSC對(duì)放射性腸損傷具有修復(fù)作用，這是通過(guò)促進(jìn)上皮完整性恢復(fù)、加速受損部位血管結(jié)構(gòu)的重建以及減輕宿主體內(nèi)炎癥反應(yīng)3方面來(lái)完成的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R818

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2281405