本文選題：SD大鼠 + 細胞培養(yǎng)��； 參考：《福建醫(yī)科大學》2013年碩士論文

【摘要】：第一部分：SD大鼠BMSCs的分離、培養(yǎng)、純化及其生物學特性鑒定的研究 目的：體外分離、培養(yǎng)、純化及鑒定SD大鼠BMSCs，以獲得純度高、生物學特征穩(wěn)定的BMSCs，為課題研究奠定基礎(chǔ)。 方法： 1運用密度梯度離心法聯(lián)合細胞貼壁法從雄性SD大鼠股骨及脛骨中分離、培養(yǎng)和純化BMSCs，并觀察細胞形態(tài)。 2流式細胞儀檢測CD34、CD44和CD90的表達。 3用馮庫薩染色法（Von Kossa）染色法、油紅O染色鑒定BMSCs向成骨、成脂肪細胞分化潛能。 結(jié)果： 1運用密度梯度離心法聯(lián)合細胞貼壁法分離培養(yǎng)的BMSCs呈克隆式生長，梭形，大小均一。P3代BMSCs純度達98.5%以上。 2培養(yǎng)的BMSCs經(jīng)流式細胞儀檢測表達CD44、CD90表面抗原，不表達CD34表面抗原。 3培養(yǎng)的BMSCs經(jīng)成骨、成脂誘導培養(yǎng)后可向成骨細胞及成脂肪細胞分化。 結(jié)論：密度梯度離心法聯(lián)合細胞貼壁法能成功分離培養(yǎng)出SD大鼠BMSCs。且形態(tài)均一、增殖能力強、純度高、生物學特征穩(wěn)定，可用于本課題對BMSCs的實驗研究。 第二部分：TGF-誘導BMSCs向上皮細胞分化的研究 目的：探究經(jīng)TGF-誘導的BMSCs向上皮細胞的分化能力及最適誘導濃度，為下一步經(jīng)TGF-刺激的BMSCs對放射性腸道損傷的實驗研究奠定基礎(chǔ)。 方法：將培養(yǎng)在3板12孔細胞培養(yǎng)皿中的BMSCs每板隨機分為四組，A組：空白對照組。B組：加入200ng/ml TGF-。C組：加入250ng/ml TGF-。D組：加入300ng/ml TGF-。用ELISA檢測第1、3、7天各組細胞培養(yǎng)液的VEGF濃度，用免疫熒光法檢測第1、3、7天BMSCs中CK蛋白。 結(jié)果：1、四組培養(yǎng)液中均檢測到VEGF，同期下C組濃度最高，P〈0.05。 2、經(jīng)TGF-刺激的BMSCs在培養(yǎng)7天后能檢測CK蛋白，同期下C組陽性率最高，P〈0.05。 結(jié)論：1、BMSCs在培養(yǎng)中能分泌VEGF 2、TGF-能促進BMSCs分泌VEGF，在250ng/ml刺激下分泌較多 3、TGF-能誘導BMSCs向上皮細胞分化，且250ng/ml的濃度誘導分化最明顯。 第三部分：經(jīng)TGF-刺激的BMSCs干細胞對急性放射性腸道損傷的實驗研究 目的：1、建立急性放射性腸損傷大鼠模型；2、觀察大鼠BMSCs及經(jīng)TGF-刺激的BMSCs對急性放射性腸道損傷的治療療效，并初步探討療效機制。 方法： 1急性放射性腸損傷大鼠模型的建立： SD大鼠在我院放療科用直線加速器進行X線照射�？倓┝�12Gy。 2造模后的180只雌性SD大鼠隨機分為3組（各60只），即A組（空白對照組）、B組（BMSCs治療組）與C組（經(jīng)TGF-刺激的BMSCs治療組）。A組于照射后4小時內(nèi)尾靜脈輸注1ml的生理鹽水；B組于照射后4小時內(nèi)尾靜脈輸注1×106/ml的SD大鼠BMSCs懸液1ml；C組于照射后4小時內(nèi)尾靜脈輸注1×106/ml的經(jīng)250ng/mlTGF-刺激的SD大鼠BMSCs懸液1ml。照射后第1天、3天、7天、14天、21天每組隨機處死6只大鼠，，留取全血與兩份末端回腸標本。光鏡下觀察腸道組織結(jié)構(gòu)，觀察絨毛高度及隱窩深度；用ELISA方法檢測血清及回腸組織中瓜氨酸及IL-6、TNF-、VEGF的濃度。 結(jié)果： 1SD大鼠急性放射性腸損傷模型建立：成功的建立了SD大鼠急性放射性腸損傷模型。 2BMSCs及經(jīng)TGF-刺激的BMSCs對急性放射性腸道損傷治療效果：（1）：與同時期A組相比較，B、C組SD大鼠回腸粘膜上皮細胞壞死和炎性細胞浸潤少，絨毛及腺體數(shù)量較多；絨毛高度及隱窩深度C㧐B㧐A，P㩳0.05。（2）：與同時期A組相比較，B、C組IL-6、TNF-在第3、7、14天濃度低，P㩳0.05，且C組濃度低于B組，P㩳0.05，第1天、21天無明顯差異，P㧐0.05。（3）：與同時期A組相比較，B、C組VEGF、瓜氨酸在第3、7、14天濃度低，P㩳0.05。且C組濃度高于B組，P㩳0.05，第1天、21天無明顯差異，P㧐0.05。（4）：組織瓜氨酸及IL-6、TNF-及VEGF濃度均高于同時期血清濃度。 結(jié)論： 1用直線加速器在總劑量12Gy下能成功建立急性放射性腸損傷動物模型。 2BMSCs及經(jīng)TGF-刺激的BMSCs均能促進急性放射腸損傷后腸道結(jié)構(gòu)及功能的修復。 3BMSCs及經(jīng)TGF-刺激的BMSCs對急性放射性腸道損傷的修復均與抗炎、促增殖有關(guān)。 4與單純BMSCs比較，經(jīng)TGF-刺激的BMSCs更顯著地促進急性放射腸損傷后腸道功能的修復。
[Abstract]:Part one: isolation, culture, purification and biological characterization of BMSCs from SD rats.
Objective: to isolate, culture, purify and identify BMSCs from SD rats in order to obtain BMSCs with high purity and stable biological characteristics.
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本文編號：1885036