本文選題：法醫(yī)毒物分析 + 乙醇　； 參考：《重慶醫(yī)科大學》2013年博士論文

【摘要】：目的： 酒精成為“馬路殺手”是全球共同面對的一個社會難題，大約50％至60％的交通事故與酒后駕車有關，灑后駕駛已成為車禍致死的首要原因。目前主要采用檢測血液中乙醇予以認定酒后駕車，但由于乙醇在體內代謝較快．一般飲酒后6～8h體內已檢測不到乙醇，特別是在酒后駕車肇事逃逸案件中，抽血與事故發(fā)生時間間隔過長，血液中往往測不出乙醇成分。可見現行方法，根據血液中乙醇含量來判斷事發(fā)時間及當事人飲用酒精量時存在諸多不足。Ets是乙醇非氧化代謝途徑的直接代謝產物，是乙醇在磺基轉移酶的作用下由硫酸鹽活化而來。飲酒后8小時Ets仍可以在血液中檢測到，3-5天仍然可以在尿液中檢測到，因此Ets可以作為乙醇代謝的標志物用于法醫(yī)學鑒定中判定酒駕。本實驗建立高效液相串聯質譜法檢測血液和尿液中硫酸乙酯的方法，運用該方法測定受試者血液和尿液中的硫酸乙酯，從而了解硫酸乙酯的代謝動力學，并將其運用于法醫(yī)學中判定酒后駕駛。 方法： 1、將D5-EtS內標工作液和乙腈（甲醇）加入空白人血液（尿液），經渦旋、離心，取上清液后用40℃水浴氮氣吹干，以甲醇（含0.1%甲酸）復溶后離心，取上清液進樣分析。 2、用高效液相色譜質譜測定血液和尿液中EtS。色譜條件：色譜柱：BOSTON-C18柱（100mm×2.1mm ID，dp3μm）；流動相：乙腈(A)-水(B)（含0.1%甲酸），梯度洗脫；流速：0.2mL·min-1；柱溫：40oC；進樣體積：5μL。質譜條件：離子源為ESI源；采用負離子模式質譜檢測，在選擇離子監(jiān)測模式下進行定性，并采用內標法進行定量。 3、7名志愿者禁酒一周后，按照0.60±0.07g/kg飲用酒精，在一定的時間間隔內每位志愿者收集12份血液標本、10份尿液標本，用液相色譜串聯質譜測定血液和尿液中的Ets濃度；用氣相色譜-火焰離子化檢測器檢測相應血液和尿液中的乙醇濃度；用Modular DDPP全自動生化分析儀測定尿中的肌酐濃度。 結果： 1、尿液中EtS在10.96~10960ng/mL范圍內線性關系良好，線性回歸方程：Y=0.0008X+0.3329（r=0.989），最低檢出限為0.1ng/mL，平均回收率為89.6%~117.4%，相對標準偏差為2.8%~10.2%；血液中EtS在5.48~10960ng/mL范圍內線性關系良好；線性回歸方程Y=0.001X+0.251（r=0.993），最低檢出限（LOD）為0.1ng/mL，平均回收率為80.4%~114.0%之間，相對標準偏差為1.4%~8.72%。 2、在消耗0.60±0.07g/kg酒精后，血液中乙醇的最高濃度為66.5±12.8mg/100ml，血液中EtS的最高濃度為79.9±12.3ng/ml；血液中乙醇達到最高濃度的時間為0.86±0.24h，血液中EtS達到最高濃度的時間為3.36h±0.56h；血液中乙醇的最長檢測時間為5.71±0.95h；最后一次采血（8h）均可在血液中檢測到EtS；在血液中乙醇濃度（mg/100ml）與EtS濃度（ng/ml）之比大于1的時間在開始喝酒的3h內（范圍在2-3.5h），隨后乙醇濃度與EtS濃度之比小于1。在尿液中，乙醇的最高濃度為193.1±26.2mg/100ml，EtS的最高濃度為6882.8±1095.0ng/ml；乙醇達到最高濃度的時間均為4h，EtS達到最高濃度的時間為4.57±0.98h；尿液中乙醇的最長檢測時間為13.9±0.6h，尿液中EtS的最長檢測時間為37.7±5.5h。在血液中，，乙醇的最高濃度與乙醇的曲線下面積之間存在相關性（相關系數為0.723，P㩳0.05）;乙醇的最高濃度與EtS的曲線下面積之間存在相關性（相關系數為0.714，P㩳0.05）；EtS的最高濃度與乙醇的曲線下面積之間存在相關性（相關系數為0.79，P㩳0.05）；EtS的最高濃度與EtS的曲線下面積之間存在相關性（相關系數為0.756，P㩳0.05），在血液中，乙醇的最高濃度與EtS的最高濃度之間存在相關性（相關系數為0.684，P㩳0.05）。 結論： 1、建立了測定血液和尿液中Ets的高效液相串聯質譜方法，樣本前處理簡單方便、穩(wěn)定性好、靈敏度高、具有較高的回收率和精密度，可應用于法醫(yī)學中血液和尿液標本中Ets的檢測。 2、通過對血液和尿液中酒精和EtS的吸收、分布、清除的代謝動力學的研究，表明血液中的EtS的含量可以用來作為飲酒時間的估計，在連續(xù)的血液樣本中檢測到EtS升高以及血液中乙醇和EtS濃度比大于1，均預示近期的飲酒（3.5h內），這是對用血液中乙醇濃度估計飲酒時間的傳統(tǒng)方法的一個較大的補充，可用于法醫(yī)學中酒駕的認定，為法庭科學提供證據。
[Abstract]:Purpose :

Alcohol has become the world ' s common social problem . About 50 % to 60 % of traffic accidents are related to drunk driving . After sprinkling , driving has become the leading cause of car accident death . A method for detecting ethyl sulfate in blood and urine by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry is established to determine the metabolism dynamics of ethyl sulfate and apply it to the determination of ethyl sulfate in blood and urine .

Method :

1 . Add the D5 - EtS internal standard working solution and acetonitrile ( methanol ) into the blank human blood ( urine ) , swirl , centrifuge , take the supernatant , dry with nitrogen at 40 鈩

本文編號：1885255