本文關(guān)鍵詞：氯胺酮注射劑量與乙醇對(duì)大鼠主要臟器中氯胺酮的死后再分布的影響

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【摘要】：目的： 1.探索最佳提取分離方法,建立大鼠臟器中氯胺酮的氣相色譜-質(zhì)譜(GasChromatography/Mass Spectrometry, GC/MS)定量分析方法。 2.用所建立的方法,對(duì)低、高劑量氯胺酮給藥及處死后不同時(shí)間解剖取材的大鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟等主要臟器中的氯胺酮含量進(jìn)行測(cè)定。對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,闡明低、高劑量氯胺酮給藥大鼠主要臟器中氯胺酮的死后再分布情況,探討低、高劑量氯胺酮給藥對(duì)大鼠主要臟器中氯胺酮死后再分布的影響。 3.用所建立的方法,對(duì)乙醇與低、高劑量氯胺酮合并給藥及處死后不同時(shí)間解剖取材的大鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟等主要臟器中的氯胺酮含量進(jìn)行測(cè)定。對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,闡明乙醇與低、高劑量氯胺酮合并給藥大鼠主要臟器中氯胺酮的死后再分布情況,探討乙醇對(duì)低、高劑量氯胺酮給藥大鼠主要臟器中氯胺酮死后再分布的影響。 方法： 1. GC/MS法測(cè)定注射氯胺酮后和氯胺酮合用乙醇后的大鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟等主要臟器中的氯胺酮含量。在1.00g臟器組織勻漿中加入內(nèi)標(biāo)物丙基解痙素(Proadifen hydrochloride, SKF-525A)50μg,在pH13下以乙酸乙酯振搖3min后離心提取2次。有機(jī)相合并,于80℃水浴揮干,殘?jiān)?00μL色譜純甲醇定容,取1μL進(jìn)樣進(jìn)行分析。采用保留時(shí)間比較法定性,內(nèi)標(biāo)工作曲線(xiàn)法定量。 2.按隨機(jī)數(shù)字表分組,將60只健康雄性Sprague-Dawley大鼠分為氯胺酮注射組(n=30)和氯胺酮合用乙醇組(n=30)。氯胺酮注射組按氯胺酮給藥劑量分為低劑量組和高劑量組,低劑量組和高劑量組又按處死后解剖取材時(shí)間分為低劑量對(duì)照組(處死后立即取材,n=5)、低劑量處死后48h取材組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)低劑量48h組,n=5)、低劑量處死后72h取材組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)低劑量72h組,n=5)和高劑量對(duì)照組(處死后立即取材,n=5)、高劑量處死后48h取材組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)高劑量48h組,n=5)、高劑量處死后72h取材組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)高劑量72h組,n=5)。氯胺酮合用乙醇組按氯胺酮給藥劑量分為低劑量合用乙醇組和高劑量合用乙醇組,低劑量合用乙醇組和高劑量合用乙醇組又按處死后解剖取材時(shí)間分為低劑量合用乙醇對(duì)照組(處死后立即取材,n=5)、低劑量合用乙醇處死后48h取材組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)低劑量合用48h組,n=5)、低劑量合用乙醇處死后72h取材組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)低劑量合用72h組,n=5)和高劑量合用乙醇對(duì)照組(處死后立即取材,n=5)、高劑量合用乙醇處死后48h取材組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)高劑量合用48h組,n=5)、高劑量合用乙醇處死后72h取材組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)高劑量合用72h組,n=5)。分別對(duì)每組動(dòng)物進(jìn)行編號(hào)。氯胺酮組分別按低劑量(30mg/kg)和高劑量(60mg/kg)采用腹腔注射氯胺酮給藥。氯胺酮合用乙醇組采用按2mL/kg劑量以20%乙醇灌胃5min后分別按低劑量(30mg/kg)和高劑量(60mg/kg)腹腔注射氯胺酮給藥。各組大鼠均持續(xù)給藥30天(每天1次,每次間隔24h)并于末次給藥后15min處死。所有大鼠對(duì)照其身體器官分布圖譜,按分組進(jìn)行解剖,分離出所需臟器組織,經(jīng)處理后按所建立的GC/MS分析方法檢測(cè)其中氯胺酮含量,并采用SPSS軟件對(duì)定量分析結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1.定性定量分析方法 對(duì)于組織中的氯胺酮,所建立的GC/MS分析方法在20-1000μg/ml的濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)y0.9997。對(duì)氯胺酮的最低檢測(cè)限為10μg/ml,最低檢出限為5ng/ml,回收率85.0%,日內(nèi)精密度RSD3.99%,日間精密度5.50%。 2.氯胺酮注射組大鼠主要臟器中氯胺酮死后再分布 (1)低劑量組：心臟中的氯胺酮含量,與低劑量對(duì)照組相比較,低劑量48h組呈上升趨勢(shì),有顯著性差異(p0.01)；低劑量72h組則有所下降,但無(wú)顯著性差異。肝臟中的氯胺酮含量,與低劑量對(duì)照組相比較,低劑量48h組和低劑量72h組有降低也有升高,未見(jiàn)顯著性差異。脾臟中的氯胺酮含量,低劑量48h組較之于低劑量對(duì)照組呈上升趨勢(shì),且有顯著性差異(p0.01)；低劑量72h組較低劑量48h組有所降低,但仍高于低劑量對(duì)照組。肺臟中的氯胺酮含量,相比于低劑量對(duì)照組,低劑量48h組和低劑量72h組均呈下降趨勢(shì),其中低劑量72h組有顯著性差異(p0.05)；腎臟中的氯胺酮含量,較之于低劑量對(duì)照組,低劑量48h組和低劑量72h組均呈下降趨勢(shì),且均有顯著性差異(p0.01)。 (2)高劑量(60mg/kg)組：心臟中的氯胺酮含量,與高劑量對(duì)照組相比較,高劑量48h組和高劑量72h組氯胺酮含量均呈上升趨勢(shì),且均有顯著性差異(p0.01)。肝臟中的氯胺酮含量,相比于高劑量對(duì)照組,高劑量48h組和高劑量72h組均呈上升趨勢(shì),且均有顯著性差異(p0.05,p0.01)。脾臟中的氯胺酮含量,與高劑量對(duì)照組相比較,高劑量48h組和高劑量72h組均呈下降趨勢(shì),其中高劑量72h組有顯著性差異(p0.01)。肺臟中的氯胺酮含量,相比于高劑量對(duì)照組,高劑量48h組和高劑量72h組氯胺酮含量均呈下降趨勢(shì),并均有顯著性差異(p0.05)。腎臟中的氯胺酮含量,相比于高劑量對(duì)照組,高劑量48h組和高劑量72h組均呈下降趨勢(shì),其中高劑量72h組有顯著性差異(p0.05)。 (3)低劑量組和高劑量組：心臟中的氯胺酮含量,高劑量對(duì)照組、高劑量48h組、高劑量72h組氯胺酮含量均較相應(yīng)低劑量組有所升高,但無(wú)顯著性差異。肝臟中的氯胺酮含量,高劑量對(duì)照組、高劑量48h組、高劑量72h組氯胺酮含量均較相應(yīng)低劑量組有所升高,其中高劑量48h組與低劑量48h組之間、高劑量72h組與低劑量72h組之間均有顯著性差異(p0.05)。脾臟中的氯胺酮含量,高劑量對(duì)照組較低劑量對(duì)照組有所升高,且有顯著性差異(p0.01)；而高劑量48h組、高劑量72h組較低劑量48h組、低劑量72h組均有所降低,但無(wú)顯著性差異。肺臟中的氯胺酮含量,高劑量對(duì)照組、高劑量48h組、高劑量72h組均較相應(yīng)低劑量組有所升高,其中高劑量72h組相較于低劑量72h組有顯著性差異(p0.05)。腎臟中的氯胺酮含量,高劑量對(duì)照組與低濃度對(duì)照組持平,高劑量48h組、高劑量72h組氯胺酮含量均較相應(yīng)低劑量組有所升高,但無(wú)顯著性差異。 3.氯胺酮合用乙醇組大鼠主要臟器中氯胺酮死后再分布 (1)低劑量合用乙醇組：心臟中的氯胺酮含量,與低劑量合用乙醇對(duì)照組比較,低劑量合用48h組和低劑量合用72h組呈上升趨勢(shì),且均有顯著性差異(p0.01)。肝臟中的氯胺酮含量,較之于低劑量合用乙醇對(duì)照組,低劑量合用48h組和低劑量合用72h組均呈上升趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異。脾臟中的氯胺酮含量,相較于低劑量合用乙醇對(duì)照組,低劑量合用48h組呈上升趨勢(shì),且有顯著性差異(p0.05)；低劑量合用72h組較低劑量合用48h組有所降低,但仍高于低劑量合用乙醇對(duì)照組,并有顯著性差異(p0.05)。肺臟中的氯胺酮含量,相比于低劑量合用乙醇對(duì)照組,低劑量合用48h組呈上升趨勢(shì),且有顯著性差異(p0.01)；低劑量合用72h組高于低劑量合用乙醇對(duì)照組,相比于低劑量合用48h組有所降低,且有顯著性差異(p0.01)。腎臟中的氯胺酮含量,低劑量合用48h組高于低劑量合用乙醇對(duì)照組,且有顯著性差異(p0.01)；低劑量合用72h組較低劑量合用48h組有所降低,但仍高于低劑量合用乙醇對(duì)照組,并有顯著性差異(p0.01)。 (2)高劑量合用乙醇組：心臟中的氯胺酮含量,高劑量合用48h組和高劑量合用72h組中較高劑量合用乙醇對(duì)照組基本持平,無(wú)顯著性差異。肝臟中的氯胺酮含量,高劑量合用48h組較高劑量合用乙醇對(duì)照組呈下降趨勢(shì),且有顯著性差異(p0.01);高劑量合用72h組較高劑量合用48h組有所升高,但仍低于高劑量合用乙醇對(duì)照組,且有顯著性差異(p0.01)。脾臟中的氯胺酮含量,高劑量合用48h組較高劑量合用乙醇對(duì)照組呈下降趨勢(shì),且有顯著性差異(p0.01)；高劑量合用72h組較高劑量合用48h組有所升高,但仍低于低高劑量合用乙醇對(duì)照組,且有顯著性差異(p0.01)。肺臟中氯胺酮含量,高劑量合用48h組較高劑量合用乙醇對(duì)照組呈上升趨勢(shì),且有顯著性差異(p0.01)；高劑量合用72h組較高劑量合用48h組迅速降低,有顯著性差異(p0.01),并低于高劑量合用乙醇對(duì)照組；腎臟中的氯胺酮含量,高劑量合用48h組和高劑量合用72h組較高劑量合用乙醇對(duì)照組呈上升趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異。 (3)低劑量合用乙醇組與高劑量合用乙醇組：心臟中的氯胺酮含量,高劑量合用乙醇對(duì)照組、高劑量合用48h組、高劑量合用72h組均較相應(yīng)低劑量合用組有所升高,其中高劑量合用乙醇對(duì)照組與低劑量合用乙醇對(duì)照組之間有顯著性差異(p0.01)。肝臟中的氯胺酮含量,高劑量合用乙醇對(duì)照組、高劑量合用48h組、高劑量合用72h組較相應(yīng)低劑量合用組呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì),其中高劑量合用乙醇對(duì)照組相比于低劑量合用乙醇對(duì)照組的含量升高,且有顯著性差異(p0.01)；脾臟中的氯胺酮含量,高劑量合用乙醇對(duì)照組、高劑量合用48h組、高劑量合用72h組較相應(yīng)低劑量合用組呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì),其中高劑量合用乙醇對(duì)照組相比于低劑量合用乙醇對(duì)照組,有顯著性差異(p0.01)。肺臟中的氯胺酮含量,高劑量合用乙醇對(duì)照組、高劑量合用48h組、高劑量合用72h組較相應(yīng)低劑量合用組有所升高,其中高劑量合用乙醇對(duì)照組相比于低劑量合用乙醇對(duì)照組,有顯著性差異(p0.05)。腎臟中的氯胺酮含量,高劑量合用乙醇對(duì)照組、高劑量合用48h組、高劑量合用72h組相較于相應(yīng)低劑量合用組呈現(xiàn)先升高后平穩(wěn)下降的趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異。 4.乙醇對(duì)氯胺酮依賴(lài)大鼠各臟器氯胺酮再分布的影響 (1)低劑量組及低劑量合用乙醇組比較：心臟中的氯胺酮含量,低劑量合用乙醇對(duì)照組、低劑量合用48h組均較相應(yīng)低劑量組有所降低,其中低劑量合用乙醇對(duì)照組與低劑量對(duì)照組間有顯著性差異(p0.01)；而低劑量合用72h組較低劑量72h組略有上升,但無(wú)顯著性差異。肝臟中的氯胺酮含量,低劑量合用乙醇對(duì)照組、低劑量合用48h組、低劑量合用72h組較相應(yīng)低劑量組呈現(xiàn)先下降后上升趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異。脾臟中的氯胺酮含量,低劑量合用乙醇對(duì)照組、低劑量合用48h組、低劑量合用72h組較相應(yīng)低劑量組呈現(xiàn)升高趨勢(shì),其中低劑量合用乙醇對(duì)照組與低劑量對(duì)照組間有顯著性差異(p0.05)。肺臟中的氯胺酮含量,低劑量合用乙醇對(duì)照組、低劑量合用48h組、低劑量合用72h組較相應(yīng)低劑量組呈現(xiàn)先下降后升高趨勢(shì),其中低劑量合用乙醇對(duì)照組與低劑量對(duì)照組間有顯著性差異(p0.01)；腎臟中的氯胺酮含量,低劑量合用乙醇對(duì)照組、低劑量合用48h組、低劑量合用72h組較相應(yīng)低劑量組呈現(xiàn)先下降后升高趨勢(shì),其中低劑量合用乙醇對(duì)照組與低劑量對(duì)照組間有顯著性差異(p0.01)。 (2)高劑量組與高劑量合用組比較：心臟中氯胺酮的含量,高劑量合用乙醇對(duì)照組、高劑量合用48h組、高劑量合用72h組較相應(yīng)高劑量組呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì),其中高劑量合用乙醇對(duì)照組較之于高劑量對(duì)照組有顯著性差異(p0.01)。肝臟中的氯胺酮含量,高劑量合用乙醇對(duì)照組、高劑量合用48h組、高劑量合用72h組較相應(yīng)高劑量組呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì),且均有顯著性差異(其中高劑量合用乙醇對(duì)照組與高劑量對(duì)照組零分布組之間p0.01,高劑量合用48h組與高劑量48h組之間以及高劑量合用72h組與高劑量72h之間p0.05)。脾臟中的氯胺酮含量,高劑量合用乙醇對(duì)照組、高劑量合用48h組、高劑量合用72h組較相應(yīng)高劑量組呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì),其中高劑量合用乙醇對(duì)照組較之于高劑量對(duì)照組有顯著性差異(p0.05)。肺臟中的氯胺酮含量,高劑量合用乙醇對(duì)照組、高劑量合用48h組、高劑量合用72h組較相應(yīng)高劑量組呈現(xiàn)先下降后上升再下降的趨勢(shì),其中高劑量合用乙醇對(duì)照組較之于高劑量對(duì)照組有顯著性差異(p0.05)；腎臟中氯胺酮的含量,高劑量合用乙醇對(duì)照組、高劑量合用48h組較相應(yīng)高劑量組有所降低,其中高劑量合用乙醇對(duì)照組較之于高劑量對(duì)照組有顯著性差異有顯著性差異(p0.01)。 結(jié)論： 1.建立了高靈敏度、高回收率、簡(jiǎn)便快捷的大鼠相關(guān)臟器中氯胺酮含量的定量分析方法。 2.氯胺酮的劑量對(duì)大鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟中氯胺酮的死后再分布有一定程度的影響。相對(duì)于氯胺酮注射組,氯胺酮合用乙醇組中的氯胺酮含量在心臟、肝臟和腎臟中總體呈現(xiàn)降低趨勢(shì),而在脾臟和肺臟中含量總體變化不是很大,既有升高也有降低。導(dǎo)致這一變化的原因,可能是乙醇的促代謝作用引起的。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：D919

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1155175