本文關(guān)鍵詞：RNAi沉默PARK2基因及對錳致大鼠紋狀體神經(jīng)細(xì)胞PARK2的表達(dá)研究

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【摘要】：目的:利用慢病毒介導(dǎo)RNAi技術(shù),構(gòu)建PARK2長時間沉默的神經(jīng)細(xì)胞,研究錳在不同濃度,相同時間條件下對PARK2作用的影響。為后期研究PARK2錳致神經(jīng)毒性效應(yīng)機(jī)制打基礎(chǔ)。方法:設(shè)計PARK2基因sh RNA靶點,用p GMLV-SC1 RNAi慢病毒載體,構(gòu)建了4對sh RNA慢病毒干擾載體,4對sh RNA慢病毒干擾載體分別感染紋狀體神經(jīng)細(xì)胞,采用蛋白印跡法(Western Blot)和實時熒光定量(Real Time PCR)方法驗證沉默效果。用單純慢病毒組和慢病毒RNAi組感染大鼠紋狀體神經(jīng)細(xì)胞分別以0、100、300、500μmol/L濃度染錳24h,用Real Time PCR和Western Blot分別檢測PARK2基因m RNA和蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果:通過酶切以及測序證明4對慢病毒干擾載體構(gòu)建成功,分別感染大鼠紋狀體神經(jīng)細(xì)胞后可觀察到GFP熒光表達(dá)。經(jīng)Western Blot與Real Time PCR驗證:PARK2表達(dá)產(chǎn)物蛋白及m RNA表達(dá)較空白組與陰性對組顯著下降(P0.01);4對sh RNA均有一定的沉默效果,其中PARK2sh RNA4沉默效果最明顯,抑制率81%;而空白組與陰性對照比較(P0.05)無統(tǒng)計學(xué)意義。Real Time PCR和Western Blot結(jié)果顯示:單純慢病毒染錳組:與對照組比較,300μmol/L和500μmol/L在錳24h作用下,PARK2m RNA及蛋白表達(dá)下降(P0.01)。慢病毒RNAi組:與對照組比較,100μmol/L-500μmol/L在錳24h作用下PARK2m RNA及蛋白表達(dá)下降(P0.01、P0.05)。結(jié)論:成功構(gòu)建慢病毒載體PARK2sh RNA表達(dá),有效的降低了大鼠紋狀體神經(jīng)細(xì)胞PARK2m RNA和其表達(dá)產(chǎn)物蛋白,使其PARK2基因沉默。錳暴露24h作用下PARK2m RNA和蛋白表達(dá)下降更顯著。
【關(guān)鍵詞】：錳 紋狀體神經(jīng)細(xì)胞 PARK2 慢病毒 shRNA
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中英文縮略詞表4-5
• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-10
• 材料與方法10-13
• 實驗方法13-25
• 結(jié)果25-35
• 討論35-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述：錳神經(jīng)毒性作用與PARK2研究進(jìn)展45-53
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 致謝53-54
• 作者簡介54

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本文編號：984325