本文關(guān)鍵詞：鷹嘴豆鐵蛋白的制備及其補鐵功效研究

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【摘要】：鐵蛋白是一種由24個亞基組成的鐵貯藏蛋白,其貯存的鐵具有可溶、無毒和生物可給性等特點,廣泛存在于動物、植物、微生物的體細(xì)胞中,具有調(diào)節(jié)生物體內(nèi)鐵的代謝平衡和解除亞鐵離子毒性的雙重作用。相對于動物鐵蛋白,植物鐵蛋白的研究較少,主要集中于豆科作物(大豆、豌豆、黃豆、蠶豆、黑豆、紅小豆、羽扇豆等)及玉米、紫花苜蓿、南瓜種子、三葉草種子、蕓豆葉等。 本課題以鷹嘴豆為原料,研究了緩沖液種類、緩沖液pH值、料液比、鹽析鹽種類、鹽濃度等因素對鷹嘴豆鐵蛋白提取率及總蛋白提取率的影響。根據(jù)Fe2+與鄰菲咯琳絡(luò)合后顯示特殊的桔紅色的反應(yīng)原理,在還原劑連二亞硫酸鈉存在的條件下,鷹嘴豆提取液中加入0.1%鄰菲咯琳溶液后顏色變化確定是否含有鐵蛋白,在510nm處測定吸光度值來進(jìn)行定量分析Braford分光光度法測定蛋白含量。在單因素實驗的基礎(chǔ)上,利用L9(34)正交實驗法及根據(jù)Box-Behnken原理采用三因素三水平的響應(yīng)面分析法優(yōu)化鐵蛋白提取工藝,在料液比1：4,濃度為50mmol/L MgCl2鹽析,KH2PO4-NaOH緩沖液pH7.5條件下,鷹嘴豆鐵蛋白最優(yōu)提取率為2.659×10-5。 鷹嘴豆經(jīng)浸泡、勻漿、過濾后粗提液依次用MgCl2和檸檬酸三鈉晶體進(jìn)行鹽析,高速離心得到粗提液經(jīng)MWC03000透析后,用DEAE-Sepharose Fast Flow弱陰離子交換柱層析,大體積pH7.5,20mmol/L KH2PO4-NaOH緩沖液平衡柱子后,以含0.1-1.0mol/L NaCl的pH7.5,20mmol/L KH2PO4-NaOH緩沖液梯度洗脫,流速1.0mL/min,5mL/管收集洗脫峰。再用Sephacryl S-500凝膠過濾層析,洗脫液為pH7.5,20mmol/L KH2PO4-NaOH,0.3mol/L NaCl。以0.5mL/min流速洗脫后再以0.1mL/min流速細(xì)分離,得到電泳純度的鐵蛋白。Native-PAGE凝膠電泳測得鷹嘴豆鐵蛋白的分子量約為560KDa, SDS-PAGE凝膠電泳測得鷹嘴豆鐵蛋白含有一種分子量為27.9KDa的亞基。 除空白對照組外,飼喂4周齡健康斷乳SPF級雌性wistar大鼠低鐵飼料4周后,眼底靜脈叢采血測定血紅蛋白(Hb)含量,選擇Hb低于90g/L的大鼠,根據(jù)體重和血紅蛋白水平隨機分為5組。除空白對照組,各組在恢復(fù)貧血實驗期間繼續(xù)給予低鐵飼料和去離子水�？瞻讓φ战M、貧血模型對照組每天灌胃給予去離子水,陽性對照組灌胃折合鐵離子含量3mg/(kg· d)硫酸亞鐵,高劑量組灌胃折合鐵離子含量3mg/(kg· d)鐵蛋白,中劑量組灌胃折合鐵離子含量1.5mg/(kg·d)鐵蛋白,低劑量組灌胃折合鐵離子含量0.75mg/(kg· d)鐵蛋白。處死大鼠后測定其各項血液學(xué)指標(biāo)(血紅蛋白、血清鐵及紅細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞體積、平均紅細(xì)胞體積、平均血紅蛋白含量等血常規(guī))及肝、心、脾、腎重量,結(jié)果表明,補充鷹嘴豆鐵蛋白可有效提高血清鐵濃度,且增加RBC及HCT濃度,改善缺鐵性貧血所致器官重量降低,有效改善缺鐵性貧血。
【關(guān)鍵詞】：純化 缺鐵性貧血 鐵蛋白 響應(yīng)面 鷹嘴豆 正交實驗
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R151;R556.3
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-7
• 英文縮略詞7-8
• 文獻(xiàn)綜述8-18
• 1 鷹嘴豆的概述8-10
• 1.1 鷹嘴豆的營養(yǎng)特點8-10
• 1.2 鷹嘴豆的應(yīng)用10
• 2 鐵的概述10-12
• 2.1 鐵的生理功能10-11
• 2.2 鐵的需求和來源11
• 2.3 鐵缺乏及預(yù)防11-12
• 3 植物鐵蛋白的概述12-18
• 3.1 植物鐵蛋白的結(jié)構(gòu)與功能12-14
• 3.2 植物鐵蛋白基因的克隆、表達(dá)調(diào)控及轉(zhuǎn)化14
• 3.3 植物鐵蛋白的分離純化14-15
• 3.4 植物鐵蛋白鐵氧化沉淀與還原釋放15-16
• 3.5 植物鐵蛋白營養(yǎng)及應(yīng)用16-18
• 前言18-19
• 第一章 鷹嘴豆鐵蛋白提取工藝優(yōu)化研究19-31
• 1 材料和方法19-21
• 1.1 實驗材料和設(shè)備19-20
• 1.2 實驗方法20-21
• 2 結(jié)果21-30
• 2.1 線性關(guān)系及回歸方程22
• 2.2 單因素實驗22-24
• 2.3 正交實驗24-27
• 2.4 響應(yīng)面實驗27-30
• 3 討論30-31
• 第二章 鷹嘴豆鐵蛋白純化及表征31-41
• 1 材料和方法31-34
• 1.1 實驗材料和設(shè)備31-32
• 1.2 實驗方法32-34
• 2 結(jié)果34-40
• 2.1 離子交換柱層析34-37
• 2.2 凝膠過濾柱層析37-38
• 2.3 凝膠電泳38-40
• 3 討論40-41
• 第三章 鷹嘴豆粗鐵蛋白補鐵功效研究41-46
• 1 材料和方法41-42
• 1.1 實驗材料和設(shè)備41
• 1.2 實驗方法41-42
• 2 結(jié)果42-44
• 2.1 缺鐵性貧血大鼠模型的建立42
• 2.2 粗鐵蛋白對缺鐵性貧血大鼠體重的影響42-43
• 2.3 粗鐵蛋白對缺鐵性貧血大鼠血紅蛋白含量的影響43
• 2.4 粗鐵蛋白對缺鐵性貧血大鼠血清鐵含量的影響43
• 2.5 粗鐵蛋白對缺鐵性貧血大鼠血液學(xué)的影響43-44
• 2.6 粗鐵蛋白對缺鐵性貧血大鼠器官的影響44
• 3 討論44-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-55
• 致謝55-56
• 個人簡歷56

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：931161