本文關(guān)鍵詞：豬肉生產(chǎn)鏈金黃色葡萄球菌分布、耐藥性及基因分型的研究

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【摘要】：金黃色葡萄球菌作為生豬肉生產(chǎn)鏈中食源性疾病的重要條件致病菌之一能夠通過食物鏈傳播至人類,給人類生命健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。本研究從某養(yǎng)殖場、屠宰車間、市場及其成品采集的507份豬源樣本,根據(jù)GB4789.10-2010對樣品進行金黃色葡萄球菌的分離鑒定,采用紙片擴散法(K-B)對14種抗生素與微量肉湯稀釋法及E-test法對萬古霉素進行抗生素敏感試驗,采用PCR方法驗證耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA),并對金黃色葡萄球菌的耐藥基因及毒力基因進行檢測,用多位點序列分析分型(MLST)及金黃色葡萄球菌表面蛋白A基因多態(tài)性分型(spa)對MRSA進行分子分型研究。具體內(nèi)容如下:1.采樣共507份,分離率達26.82%。源頭養(yǎng)殖場中環(huán)境中柵欄門、地面、豬鼻拭子等環(huán)境樣中,金黃色葡萄球菌分離率為17.26%;而屠宰環(huán)節(jié)的的176份里中,有39.63%的金黃色葡萄球菌檢出率;采自儲存車間里的樣品,分離率達16.98%;各大超市及市場生豬肉里金葡的分離率是30%。2.對分離得到的136株菌采用CLSI2012推薦的紙片擴散法對14種抗生素進行藥物敏感試驗,136株菌對14種抗生素呈現(xiàn)不同程度的耐藥性:對青霉素耐藥率較高,達92.64%;對四環(huán)素、克林霉素、克拉霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、慶大霉素、氯霉素的耐藥率在24.26%-56.61%之間;本次分離菌株多重耐藥菌株數(shù)達56.6%。不同來源的金葡對14種抗生素顯示不同的耐藥譜。3.對耐藥基因及毒力基因的PCR結(jié)果顯示,本試驗檢測的136株菌中四環(huán)素基因tetK檢出率最高,達90.44%,來自市場生豬肉樣本的金葡檢出tetM攜帶率最高,為24.24%。耐大環(huán)內(nèi)酯類抗生素菌株中耐藥基因ermA/B/C檢出率為16.42%,其中ermB檢出率較高(11.76%,16/136)。不同來源的菌株中毒力基因的檢出率各有差異,各類毒力基因中a-溶血素(hla)陽性菌株檢測率最高,總檢出率為48.5%。根據(jù)PCR檢測結(jié)果,共檢測攜帶mecA基因的21株,檢測率為15.44%(21/136)。本次實驗中尚未檢測到mecC基因與殺白細(xì)胞毒素基因(pvl)。4.對分離的MRSA進行分子流行病學(xué)研究,采用多位點序列分析分型(MLST)及金黃色葡萄球菌表面蛋白A基因多態(tài)性分型(spa)方法進行分析,結(jié)果顯示,對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌進行MLST序列分型分析,分型后得到7個型別:ST9、ST1、ST398、ST188、ST239、ST1516以及ST7,其中ST9為我國發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖場內(nèi)MRSA優(yōu)勢型。對SPA分型,本實驗spa基因重復(fù)序列數(shù)為5-11個共分得7個型別,分布為t034、t037、t091、t189、t899、t1775和t1852,以t899為主(27.78%)。綜上所述,生豬肉生產(chǎn)鏈中金黃色葡萄球菌污染較為嚴(yán)重,各個環(huán)節(jié)的分離得到的葡萄球菌的耐藥譜及毒力基因各具特點,為豬肉生產(chǎn)鏈中的金黃色葡萄球菌的耐藥性及流行病學(xué)相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：金黃色葡萄球菌 MRSA 耐藥基因 毒力基因 MLST spa
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 英文縮寫表12-14
• 第一章 緒論14-26
• 1.1 金黃色葡萄球菌與養(yǎng)殖場及加工過程環(huán)境安全14-17
• 1.1.1 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）生物學(xué)特性及流行特點14-15
• 1.1.2 MRSA的生物學(xué)特性及流行特點15-17
• 1.1.3 LA-MRSA的研究現(xiàn)狀17
• 1.2 耐藥機制及毒力機制17-22
• 1.2.1 金黃色葡萄球菌耐藥機制17-20
• 1.2.2 毒力機制20-22
• 1.3 金黃色葡萄球菌分型方法22-24
• 1.3.1 金黃色葡萄球菌分型方法概述22
• 1.3.2 多位點序列分析 （MLST）22-23
• 1.3.3 金黃色葡萄球菌表面蛋白A基因多態(tài)性分型 (spa)23-24
• 1.3.4 葡萄球菌基因盒分型（SCCmec）24
• 1.4 本課題的研究意義及主要內(nèi)容24-26
• 第二章 樣品的采集及金黃色葡萄球菌的分離26-32
• 2.1 引言26
• 2.2 材料和方法26-28
• 2.2.1 主要儀器和設(shè)備26-27
• 2.2.2 主要實驗材料27
• 2.2.3 主要試劑的配置27-28
• 2.3.試驗方法28-30
• 2.3.1 金黃色葡萄球菌的分離及鑒定28-30
• 2.4 結(jié)果分析30
• 2.4.1 金黃色葡萄球菌的檢出狀況30
• 2.4.2 不同流通領(lǐng)域金黃色葡萄球菌分離情況30
• 2.5 小結(jié)30-32
• 第三章 金黃色葡萄球菌耐藥性研究32-44
• 3.1 引言32
• 3.2 實驗材料設(shè)備及試驗方法32-37
• 3.2.1 實驗菌株32
• 3.2.2 實驗設(shè)備32-33
• 3.2.3 實驗材料33
• 3.2.4 主要培養(yǎng)基的配置33-34
• 3.2.5 試驗方法34-37
• 3.3 結(jié)果與分析37-42
• 3.3.1 金黃色葡萄球菌對抗生素的耐藥情況37-38
• 3.3.2 不同來源金黃色葡萄球菌耐藥狀況38-39
• 3.3.3 金黃色葡萄球菌對萬古霉素的耐藥狀況39-40
• 3.3.4 金黃色葡萄球菌的多重耐藥性40-41
• 3.3.5 MRSA與MSSA耐藥狀況對比41-42
• 3.4 小結(jié)42-44
• 第四章 耐藥基因及毒力基因的研究44-53
• 4.1 引言44
• 4.2 材料和方法44-45
• 4.2.1 主要儀器和設(shè)備44-45
• 4.2.2 主要試劑耗材45
• 4.3 實驗方法45-48
• 4.3.1 DNA模板的制備45-46
• 4.3.2 引物的合成46-47
• 4.3.3 PCR反應(yīng)體系47
• 4.3.4 PCR反應(yīng)條件47
• 4.3.5 電泳檢測PCR產(chǎn)物47-48
• 4.4 實驗結(jié)果48-51
• 4.4.1 不同樣本來源毒力基因及耐藥基因的檢測結(jié)果48-49
• 4.4.2 不同來源的金黃色葡萄球菌毒素基因的分布49-50
• 4.4.3 耐藥表型和基因型的比較50
• 4.4.4 PCR檢測mecA基因和mecC基因50-51
• 4.4.5 苯唑西林法，頭孢西丁與PCR法檢測MRSA的比較51
• 4.5 小結(jié)51-53
• 第五章 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的MLST及spa分型的研究53-62
• 5.1 引言53
• 5.2 材料和方法53-55
• 5.2.1 菌株53
• 5.2.2 主要儀器儀器和設(shè)備53-54
• 5.2.3 主要試劑耗材54-55
• 5.3 實驗方法55-57
• 5.3.1 DNA模板的制備55
• 5.3.2 MLST分型及spa分型引物55
• 5.3.3 反應(yīng)體系55-56
• 5.3.4 PCR反應(yīng)條件56
• 5.3.5 電泳檢測56-57
• 5.3.6 產(chǎn)物測序及結(jié)果處理57
• 5.4 結(jié)果與分析57-61
• 5.4.1 耐甲氧西林金葡菌MLST序列分型結(jié)果57-58
• 5.4.2 spa分型結(jié)果58-59
• 5.4.3 對MLST相關(guān)性分析59
• 5.4.4 MLST分型及spa分型與耐藥譜結(jié)果相關(guān)性59-61
• 5.5 小結(jié)61-62
• 結(jié)論與展望62-64
• 參考文獻64-77
• 附錄77-85
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果85-86
• 致謝86-87
• 答辯委員會對論文的評定意見87

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1 白潔;機組配餐員的金黃色葡萄球菌污染情況[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);2002年02期

2 朱自強;;金黃色葡萄球菌更具殺傷力的原因在于其金黃色“外殼”[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2005年11期

3 杜洪利;張雙雙;歐旭;閆訓(xùn)友;;金黃色葡萄球菌檢測技術(shù)研究進展[J];食品與發(fā)酵科技;2009年05期

4 黃嶺芳;賴衛(wèi)華;張莉莉;;食品中金黃色葡萄球菌快速檢測方法的研究進展[J];食品與機械;2009年06期

5 王娉;勞華均;胡s，

本文編號：914786