發(fā)布時間：2017-09-19 16:05

  本文關(guān)鍵詞：NF-κB抑制劑PDTC對鈾礦塵致巨噬細胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用

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【摘要】：目的:探討鈾礦塵致RAW264.7炎癥反應(yīng)過程中NF-κB對TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS和NO的調(diào)節(jié)作用,分析核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB在鈾礦塵致肺部損傷機制中的作用,以及尋找抑制鈾礦塵致肺纖維化的重要靶點。方法:采用MTT法檢測不同濃度鈾礦塵作用于RAW264.7細胞不同時間對細胞存活率的影響;Western Blot檢測鈾礦塵對細胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白及細胞漿內(nèi)iNOS蛋白表達的影響;Q-PCR檢測鈾礦塵對RAW264.7細胞中TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA的影響;ELISA檢測鈾礦塵對RAW264.7細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-6、MCP-1含量的影響;硝酸還原酶法檢測鈾礦塵對RAW264.7細胞培養(yǎng)上清液中NO含量的影響。結(jié)果:MTT結(jié)果顯示0、15、30、60、120、240μg/cm2濃度鈾礦塵分別作用于RAW264.7細胞12、24、48h后,RAW264.7細胞存活率呈作用劑量和作用時間依賴性下降。60μg/cm2鈾礦塵作用于RAW264.7細胞后,細胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達水平隨著鈾礦塵作用時間的延長呈上升趨勢,至12h時鈾礦塵組NF-κB p65蛋白相對表達量是對照組的5.10倍;細胞內(nèi)TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA的表達水平較對照組升高;細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-6、MCP-1以及NO含量隨著鈾礦塵作用時間的延長呈上升趨勢,至24h時鈾礦塵組TNF-α、IL-6、MCP-1及NO表達量分別為(12827.78±518.77)pg/ml、(224.63±10.38)pg/ml、(4178.59±26.04)pg/ml、(202.30±10.62)μmol/L,均顯著高于該時間點對照組的表達量;細胞漿內(nèi)i NOS蛋白表達水平隨著鈾礦塵作用時間的延長呈上升趨勢,至24h時鈾礦塵組i NOS蛋白相對表達量是對照組的4.50倍。用25μmol/L PDTC干預(yù)后,細胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達水平與對照組接近,顯著低于鈾礦塵組的表達水平;細胞上清液中TNF-α、IL-6、NO含量明顯低于鈾礦塵組,與對照組表達量較接近;細胞上清液中MCP-1含量與鈾礦塵比較差異無統(tǒng)計學意義,明顯高于對照組的表達水平;細胞漿中iNOS蛋白表達水平與對照組接近,顯著低于鈾礦塵組的表達水平。結(jié)論:1.15-240μg/cm2鈾礦塵可以抑制小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞增殖并誘導其NF-κB、TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS及NO表達升高;2.25μmol/L NF-κB抑制劑PDTC可以在一定程度上干預(yù)鈾礦塵所致的巨噬細胞炎性損傷。
【關(guān)鍵詞】：鈾礦塵 巨噬細胞 炎癥 NF-κB
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R135.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 前言12-16
• 第2章 材料與方法16-30
• 2.1 實驗材料16-20
• 2.1.1 實驗細胞及其培養(yǎng)、傳代、凍存、復蘇16
• 2.1.2 實驗粉塵的配制及其分組16-17
• 2.1.3 主要試劑17-18
• 2.1.4 主要儀器18-19
• 2.1.5 主要試劑的配制19-20
• 2.2 實驗方法20-29
• 2.2.1 MTT檢測細胞存活率20
• 2.2.2 Western Blot法檢測細胞漿iNOS蛋白和細胞核NF-κBp65蛋白的表達20-23
• 2.2.3 Q-PCR檢測細胞內(nèi)TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA的表達水平23-26
• 2.2.4 ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-6、MCP-1的表達水平26-28
• 2.2.5 硝酸還原酶法檢測細胞培養(yǎng)上清液中NO的表達水平28-29
• 2.3 統(tǒng)計分析29-30
• 第3章 結(jié)果30-44
• 3.1 鈾礦塵對RAW264.7 細胞存活率的影響30
• 3.2 鈾礦塵對RAW264.7 細胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達的影響30-32
• 3.3 鈾礦塵對RAW264.7 細胞TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA表達的影響32-34
• 3.3.1 鈾礦塵對RAW264.7 細胞TNF-α mRNA表達的影響32
• 3.3.2 鈾礦塵對RAW264.7 細胞IL-6 mRNA表達的影響32-33
• 3.3.3 鈾礦塵對RAW264.7 細胞MCP-1 mRNA表達的影響33
• 3.3.4 鈾礦塵對RAW264.7 細胞iNOS m RNA表達的影響33-34
• 3.4 鈾礦塵對RAW264.7 細胞TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS蛋白表達的影響34-39
• 3.4.1 鈾礦塵對RAW264.7 細胞上清液中TNF-α含量的影響34-35
• 3.4.2 鈾礦塵對RAW264.7 細胞上清液中IL-6 含量的影響35-36
• 3.4.3 鈾礦塵對RAW264.7 細胞上清液中MCP-1 含量的影響36-37
• 3.4.4 鈾礦塵對RAW264.7 細胞漿內(nèi)iNOS蛋白表達的影響37-39
• 3.5 鈾礦塵對RAW264.7 細胞上清液中NO含量的影響39-40
• 3.6 NF-κB抑制劑（PDTC）對鈾礦塵致RAW264.7 巨噬細胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用40-44
• 3.6.1 PDTC對RAW264.7 細胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達的影響40
• 3.6.2 PDTC對RAW264.7 細胞上清液中TNF-α 含量的影響40-41
• 3.6.3 PDTC對RAW264.7 細胞上清液中IL-6 含量的影響41
• 3.6.4 PDTC對RAW264.7 細胞上清液中MCP-1 含量的影響41-42
• 3.6.5 PDTC對RAW264.7 細胞漿中iNOS蛋白表達的影響42-43
• 3.6.6 PDTC對RAW264.7 細胞上清液中NO含量的影響43-44
• 第4章 討論44-50
• 4.1 鈾礦塵對RAW264.7 細胞NF-κB表達的影響44-45
• 4.2 鈾礦塵對RAW264.7 細胞炎癥相關(guān)活性物質(zhì)的影響45-47
• 4.3 PDTC對鈾礦塵致RAW264.7 細胞炎癥損傷的干預(yù)作用47-50
• 第5章 結(jié)論50-52
• 參考文獻52-62
• 文獻綜述62-72
• 參考文獻68-72
• 附錄72-73
• 研究生學習期間發(fā)表的論文73-74
• 致謝74

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本文編號：882569