本文關(guān)鍵詞：食品中鎘離子膠體金免疫層析快速檢測方法的建立及應(yīng)用

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【摘要】：目的:建立更加靈敏、特異的食品鎘離子膠體金免疫層析快速檢測方法。方法:用1-(4-異硫氰芐基)乙烯基二胺-N,N,N’,N’-四乙酸(1-(4-isothiocyanobenzyl)ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid,iEDTA)鰲合鎘離子合成Cd~(2+)-iEDTA半抗原,異硫氰酯法制備免疫原Cd~(2+)-iEDTA-牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和包被原Cd~(2+)-iEDTA-雞卵清蛋白(ovalbumin,OVA),電感耦合等離子體發(fā)射光譜法和聚丙烯酰胺凝膠法進(jìn)行鑒定;用Cd~(2+)-iEDTA-BSA免疫Balb/C小鼠,細(xì)胞融合技術(shù)篩選Cd~(2+)-EDTA單克隆抗體(mAb)雜交瘤細(xì)胞株,體內(nèi)誘生腹水法制備Cd~(2+)-EDTA mAb;應(yīng)用Cd~(2+)-EDTA mAb建立Cd~(2+)殘留膠體金免疫層析快速檢測方法 (Cd~(2+)-Strip),并測定其性能。結(jié)果:免疫原偶聯(lián)成功,Cd~(2+)-iEDTA-BSA中BSA與Cd~(2+)的含量分別為7.1 mg/mL和191.7μg/mL;篩選出1A3C11、2B7D8、2E10G9、4F3E7共4株雜交瘤細(xì)胞,經(jīng)9次傳代分泌抗體穩(wěn)定,親和力最高的2E10G9株親和常數(shù)(Ka)為7.58×10~8 L/mol,對Cd~(2+)-iEDTA的半數(shù)抑制濃度為16.3μg/L,與Hg~(2+)-EDTA的交叉反應(yīng)(cross-reaction,CR)率為18.6%,與其他重金屬離子無CR;Cd~(2+)-Strip的檢測時(shí)間為10 min,檢出限為5μg/L,其檢測結(jié)果與競爭ELISA試劑盒(Cd~(2+)ELISA-Kit)、電感耦合等離子體發(fā)射光譜法符合率為100%。結(jié)論:制備出了親和力高、特異性強(qiáng)的Cd~(2+)mAb,建立了靈敏、特異、快速、簡便的食品鎘離子膠體金免疫層析快速檢測方法。
【作者單位】： 河南科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院;河南科技學(xué)院新科學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 鎘離子 免疫原 單克隆抗體 膠體金免疫層析 快速檢測
【基金】：“十二五”國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAK10B01;2014BAD13B05)
【分類號】：R155.5
【正文快照】： 重金屬污染殘留給生態(tài)環(huán)境、食品安全和人類健康帶來了嚴(yán)重危害,2012年發(fā)生在廣西的龍江河鎘污染事件[1]和2013年發(fā)生在湖南的大米鎘超標(biāo)事件[2],再次引發(fā)政府和社會對鎘污染的廣泛關(guān)注。鎘離子(Cd2+)對人體具有腎臟[3]、肝臟[4]、心血管[5]、神經(jīng)[6]、致癌[7]等多種毒性作用[

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本文編號：864288