本文關(guān)鍵詞：壬基酚及其異構(gòu)體對NCTC Clone 1469小鼠肝細(xì)胞株的影響

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【摘要】：壬基酚(4-n-Nonylphenol,4-n-NP)是生活中廣泛存在的環(huán)境激素,它們在自然環(huán)境中不易降解,具有較強(qiáng)的生物累積性,對于機(jī)體內(nèi)各臟器都具有損害作用,研究4-n-NP及其同分異構(gòu)體的生物學(xué)效應(yīng)已成為熱點。本文以體外培養(yǎng)的NCTC Clone 1469小鼠肝細(xì)胞株作為毒理學(xué)模型,探討了4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞的毒性作用、氧化應(yīng)激作用、凋亡作用,以及壬基酚異構(gòu)體對NCTC Clone 1469細(xì)胞膽汁酸分泌的影響,為壬基酚及其異構(gòu)體的環(huán)境風(fēng)險評估提供理論依據(jù)。首先,本論文探討了4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞的毒性作用,得出結(jié)果如下:(1)60、80、100μmol/L 4-n-NP作用于NCTC Clone 1469細(xì)胞可顯著抑制細(xì)胞生長,改變細(xì)胞形態(tài),并導(dǎo)致培養(yǎng)液中LDH、ALT、AST活性顯著升高;(2)4-n-NP(1-40μmol/L)可上調(diào)NCTC Clone 1469細(xì)胞內(nèi)雌激素受體ERα、ERβmRNA及蛋白表達(dá);(3)雌激素拮抗劑ICI 182780無法減弱4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞的毒性作用。結(jié)果表明,4-n-NP可對NCTC Clone 1469細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用,并在一定濃度范圍內(nèi)可刺激細(xì)胞內(nèi)雌激素受體表達(dá),且兩者無關(guān)。第二,本論文從抗氧化酶系統(tǒng)及過氧化產(chǎn)物兩方面綜合探討了4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞的氧化應(yīng)激作用,得出結(jié)果如下:(1)4-n-NP可使NCTC Clone 1469細(xì)胞內(nèi)ROS水平及MDA含量升高;(2)60μmol/L 4-n-NP顯著降低NCTC Clone 1469細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT活性;(3)抗氧化劑NAC可顯著減弱4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞產(chǎn)生的毒性作用。由此結(jié)果推測4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞產(chǎn)生的毒性作用或與氧化應(yīng)激作用有關(guān)。第三,本論文利用流式雙染法及免疫印跡法探討了4-n-NP對NCTC Clone1469細(xì)胞的凋亡作用及潛在機(jī)制,得出結(jié)果如下:(1)4-n-NP可活化NCTC Clone1469細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白酶(Caspase-3、Caspase-12);(2)20-60μmol/L 4-n-NP可上調(diào)NCTC Clone 1469細(xì)胞內(nèi)促凋亡相關(guān)蛋白Bax的表達(dá),同時下調(diào)細(xì)胞內(nèi)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá);(3)1-60μmol/L 4-n-NP藥物組均可導(dǎo)致NCTC Clone1469細(xì)胞凋亡率及鈣離子水平升高且具有濃度依賴性;(4)Caspase-3抑制劑Z-DEVD-FMK或Caspase-12抑制劑Z-ATAD-FMK均可抑制NCTC Clone 1469細(xì)胞凋亡并降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平。最后,本論文通過酶聯(lián)免疫吸附實驗、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)探究12種4-NP異構(gòu)體對NCTC Clone 1469細(xì)胞總膽汁酸分泌量及膽汁酸代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響,結(jié)果表明60μmol/L 4-NP37、4-NP111、4-NP112、4-NP194可使NCTC Clone1469細(xì)胞總膽汁酸分泌量顯著升高,并促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)雌激素受體ERα、膽汁酸代謝相關(guān)基因(CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1)表達(dá),推測此4種壬基酚異構(gòu)體促使NCTC Clone 1469細(xì)胞總膽汁酸分泌量增加或與刺激ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 mRNA表達(dá)有關(guān)。綜上所述,本研究明確了4-n-NP對NCTC Clone 1469小鼠肝細(xì)胞所造成的損傷作用包括細(xì)胞毒性、氧化應(yīng)激及凋亡;4-NP異構(gòu)體可改變NCTC Clone 1469小鼠肝細(xì)胞總膽汁酸分泌量,其潛在途徑或與4-n-NP影響細(xì)胞內(nèi)雌激素受體基因、膽汁酸代謝相關(guān)基因表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：壬基酚 壬基酚異構(gòu)體 氧化應(yīng)激作用 細(xì)胞凋亡 雌激素效應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R114;O625.3
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 符號說明10-11
• 第1章 緒論11-17
• 1.1 環(huán)境激素11-12
• 1.1.1 環(huán)境激素的定義11
• 1.1.2 環(huán)境激素污染狀況與危害11
• 1.1.3 環(huán)境激素毒性作用機(jī)制11-12
• 1.2 壬基酚12-13
• 1.2.1 壬基酚的來源12
• 1.2.2 壬基酚的檢測方法12-13
• 1.2.3 壬基酚的生物毒性作用13
• 1.3 壬基酚異構(gòu)體13-15
• 1.3.1 壬基酚異構(gòu)體的分離與測定13-14
• 1.3.2 壬基酚異構(gòu)體在環(huán)境中的分布14
• 1.3.3 壬基酚異構(gòu)體的雌激素效應(yīng)14-15
• 1.4 本研究的目的、主要研究內(nèi)容及創(chuàng)新性15-17
• 1.4.1 研究目的15
• 1.4.2 主要的研究內(nèi)容15
• 1.4.3 主要的創(chuàng)新點15-17
• 第2章 4-n-NP對NCTC Clone 1469小鼠肝細(xì)胞株的毒性作用17-37
• 2.1 引言17-18
• 2.2 材料與方法18-28
• 2.2.1 實驗材料18-21
• 2.2.2 實驗方法21-28
• 2.3 實驗結(jié)果28-34
• 2.3.1 4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞存活率的影響28-29
• 2.3.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果29
• 2.3.3 4-n-NP對細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH、ALT、AST活性的影響29-30
• 2.3.4 4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞ERα、ERβ m RNA表達(dá)的影響30-31
• 2.3.5 4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞ERα、ERβ 蛋白表達(dá)的影響31-33
• 2.3.6 4-n-NP引起NCTC Clone 1469細(xì)胞毒性作用與雌激素受體的關(guān)系33-34
• 2.4 討論34-35
• 2.5 本章小結(jié)35-37
• 第3章 4-n-NP對NCTC Clone 1469小鼠肝細(xì)胞株的氧化應(yīng)激作用37-48
• 3.1 引言37
• 3.2 材料與方法37-40
• 3.2.1 實驗材料37-39
• 3.2.2 實驗方法39-40
• 3.3 實驗結(jié)果40-45
• 3.3.1 4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響40-43
• 3.3.2 4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞內(nèi)MDA含量、SOD及CAT活性的影響43-44
• 3.3.3 4-n-NP引起NCTC Clone 1469細(xì)胞毒性作用與氧化應(yīng)激的關(guān)系44-45
• 3.4 討論45-46
• 3.5 本章小結(jié)46-48
• 第4章 4-n-NP對NCTC Clone 1469小鼠肝細(xì)胞株凋亡的影響48-62
• 4.1 引言48
• 4.2 材料與方法48-54
• 4.2.1 實驗材料48-51
• 4.2.2 實驗方法51-54
• 4.3 實驗結(jié)果54-59
• 4.3.1 4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞內(nèi)Caspase-3 及Caspase-12活性的影響54-55
• 4.3.2 4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞凋亡的影響55
• 4.3.3 4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平的影響55-58
• 4.3.4 4-n-NP對NCTC Clone 1469細(xì)胞Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響58-59
• 4.4 討論59-61
• 4.5 本章小結(jié)61-62
• 第5章 4-NP異構(gòu)體對NCTC Clone 1469小鼠肝細(xì)胞株膽汁酸分泌的影響62-79
• 5.1 引言62-63
• 5.2 材料與方法63-67
• 5.2.1 實驗材料63-65
• 5.2.2 實驗方法65-67
• 5.3 實驗結(jié)果67-77
• 5.3.1 4-NP異構(gòu)體對NCTC Clone 1469細(xì)胞總膽汁酸分泌的影響67-69
• 5.3.2 4-NP_37對NCTC Clone 1469細(xì)胞ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 m RNA表達(dá)的影響69-71
• 5.3.3 4-NP_111對NCTC Clone 1469細(xì)胞ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 m RNA表達(dá)的影響71-73
• 5.3.4 4-NP_112對NCTC Clone 1469細(xì)胞ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 m RNA表達(dá)的影響73-75
• 5.3.5 4-NP_194對NCTC Clone 1469細(xì)胞ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 m RNA表達(dá)的影響75-77
• 5.4 討論77-78
• 5.5 本章小結(jié)78-79
• 第6章 結(jié)論與展望79-81
• 6.1 結(jié)論79-80
• 6.2 進(jìn)一步的研究方向80-81
• 致謝81-82
• 參考文獻(xiàn)82-90
• 攻讀學(xué)位期間研究成果90

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 肖全偉,黎源倩,吳德生;高效液相色譜法測定大鼠組織中雙酚A和4-壬基酚濃度[J];色譜;2004年06期

2 范奇元,李衛(wèi)華,金泰^，

本文編號：840202