發(fā)布時(shí)間：2017-09-06 19:52

  本文關(guān)鍵詞：氟對(duì)小鼠海馬微管蛋白Tubulin表達(dá)的影響

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【摘要】：[目的]研究氟對(duì)小鼠海馬微管蛋白的影響,觀察小鼠海馬微管形態(tài)的變化,并測(cè)定小鼠海馬組織中Tubulin-α、Tubulin-β的基因水平和蛋白水平的變化,探討不同濃度氟對(duì)小鼠海馬微管蛋白的影響。[方法]選擇體重為(22±2)g的健康昆明系小鼠60只,基礎(chǔ)飼料及去離子水飲水一周適應(yīng)環(huán)境后,隨機(jī)分為4組,每組15只,每組分別為對(duì)照組、低劑量組(25mg/LNaF)、中劑量組(50mg/L NaF)、高劑量組(100mg/L NaF),每個(gè)試驗(yàn)組均給以基礎(chǔ)飼料,自由飲食飲水,每天記錄小鼠飲水飲食情況,每周記錄小鼠體重。飼養(yǎng)60日,稱重處死。透射電鏡觀察小鼠海馬超微結(jié)構(gòu)的病理變化；提取小鼠海馬組織中總RNA,利用RT-PCR,分別測(cè)定其中Tubulin-α、Tubulin-β基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量；制作切片,利用免疫組化定位檢測(cè)Tubulin-α、Tubulin-β蛋白的表達(dá)的位置和變化；提取小鼠海馬組織中總蛋白,利用Western Blot進(jìn)一步檢測(cè)其中Tubulin-α、Tubulin-β蛋白的表達(dá)量。[結(jié)果](1)與對(duì)照組相比,低氟組微管連貫性較差,微管數(shù)量多、部分?jǐn)嗔?組織緊密,少量微管傾斜于主軸,截面微管均勻排列；中氟組微管連貫性差,組織較為松散,微管彎曲且與主軸不平行；高氟組微管連貫性差,斷裂嚴(yán)重,組織松散,排布密度明顯減小,截面微管排列不均勻。氟濃度越高,微管形態(tài)受氟的影響越大。(2)與對(duì)照組相比,低氟組小鼠海馬組織中基因Tubulin-α 和 Tubulin-β mRNA表達(dá)量升高,差異不顯著(P0.05,而在中氟組和高氟組均降低,其中高氟組差異顯著(P0.05(3)通過免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn),高氟組Tubulin-α 和 Tubulin-β陽(yáng)性產(chǎn)物交錯(cuò)彎曲,由細(xì)條狀變?yōu)槌善淖厣?錐體細(xì)胞層稀薄,細(xì)胞減小,細(xì)胞層疏松、紊亂,細(xì)胞質(zhì)變薄。與對(duì)照組相比較,低氟組小鼠海馬組織中微管蛋白Tubulin-α、Tubulin-β蛋白表達(dá)量升高,差異不顯著(P0.05；在中氟組和高氟組微管蛋白Tubulin-α、Tubulin-β蛋白表達(dá)量均降低,其中高氟組差異顯著(P0.05)。[結(jié)論]氟使小鼠海馬組織微管蛋白的形態(tài)發(fā)生改變,在本試驗(yàn)的時(shí)間內(nèi)低濃度氟可促進(jìn)微管蛋白r(?)RNA和蛋白的表達(dá),而高濃度的氟抑制微管蛋白raRNA和蛋白的表達(dá),不同濃度的氟均會(huì)破壞小鼠海馬的骨架蛋白,從而影響小鼠大腦發(fā)育。但是在一定時(shí)間內(nèi)低濃度氟對(duì)海馬組織微管蛋白表達(dá)的促進(jìn)機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：氟 海馬組織 微管蛋白-α 微管蛋白-β
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114;Q78
【目錄】：

• 摘要7-9
• 前言9-15
• 1 氟對(duì)大腦神經(jīng)系統(tǒng)的的影響9-12
• 1.1 氟在腦組織中的含量以及對(duì)腦重的影響9-10
• 1.2 氟對(duì)大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響10-11
• 1.2.1 氟對(duì)大腦的形態(tài)學(xué)變化10-11
• 1.2.2 氟對(duì)動(dòng)物大腦DNA損傷的影響11
• 1.2.3 氟對(duì)大腦氧化損傷的影響11
• 1.3 氟對(duì)學(xué)習(xí)記憶和智商的影響11-12
• 2 微管蛋白12-13
• 3 研究目的與意義13
• 4 技術(shù)路線13-15
• 第一章 氟對(duì)小鼠海馬微管形態(tài)的影響15-19
• 1 材料與方法15-16
• 1.1 材料15
• 1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物15
• 1.1.2 主要試劑15
• 1.2 方法15-16
• 1.2.1 動(dòng)物模型的建立15-16
• 1.2.2 樣品的采集16
• 1.2.3 電鏡切片的制備16
• 1.2.4 圖像采集16
• 2 結(jié)果與分析16-17
• 3 討論17-18
• 4 小結(jié)18-19
• 第二章 氟對(duì)小鼠海馬微管蛋白相關(guān)基因表達(dá)量的影響19-28
• 1 材料與方法19-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物19
• 1.1.2 試驗(yàn)主要試劑19
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備19-20
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法20-22
• 1.2.1 動(dòng)物模型的建立20
• 1.2.2 樣品的采集20
• 1.2.3 小鼠海馬總RNA的提取20-21
• 1.2.4 總RNA質(zhì)量檢測(cè)21
• 1.2.5 熒光定量PCR檢測(cè)海馬中Tubulin-α、Tubulin-β基因mRNA的表達(dá)量21-22
• 2 結(jié)果與分析22-26
• 2.1 總RNA質(zhì)量及濃度鑒定22-23
• 2.2 海馬組織Tubulin-α和Tubulin-β的擴(kuò)增曲線以及熔解曲線23-25
• 2.3 不同濃度氟對(duì)小鼠海馬中Tubulin-α、Tubulin-β基因mRNA表達(dá)量的影響25-26
• 3 討論26-27
• 4 小結(jié)27-28
• 第三章 氟對(duì)小鼠海馬微管蛋白細(xì)胞結(jié)構(gòu)和蛋白表達(dá)的影響28-38
• 1 材料與方法28-32
• 1.1 材料28-29
• 1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物28
• 1.1.2 主要試劑28-29
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備29
• 1.2 方法29-32
• 1.2.1 動(dòng)物模型的建立29
• 1.2.2 樣品的采集29
• 1.2.3 主要試劑的配制29-30
• 1.2.4 石蠟切片脫蠟30
• 1.2.5 免疫組化石蠟切片熱修復(fù)染色程序30-31
• 1.2.6 Western Blot檢測(cè)31-32
• 1.2.7 SDS-PAGE電泳檢測(cè)蛋白32
• 2 結(jié)果與分析32-36
• 2.1 氟對(duì)小鼠海馬微管蛋白Tubulin-α和Tubulin-β細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響32-35
• 2.2 微管蛋白Tubulin-α和Tubulin-β免疫印跡結(jié)果35-36
• 3 討論36-37
• 4 小結(jié)37-38
• 全文結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• Abstract43-45
• 致謝45

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：805123