本文關(guān)鍵詞：檢測牛奶中布魯氏菌套式PCR方法的建立

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【摘要】：為檢測牛奶中的布魯氏菌,通過對布魯氏菌外膜蛋白31 k Da的一段基因進(jìn)行套式PCR擴(kuò)增,建立從臨床奶樣中檢測布魯氏菌的方法。改進(jìn)了奶樣中布魯氏菌基因組DNA的提取方法,通過正交試驗(yàn)的方法優(yōu)化了套式PCR試驗(yàn)的反應(yīng)條件,優(yōu)化后的一擴(kuò)PCR反應(yīng)條件為:退火溫度56.4℃,Mg~(2+)濃度1.5 m M,rTaq酶0.2μL,引物0.3μM,d NTP濃度0.2 m M;二擴(kuò)PCR反應(yīng)條件為:退火溫度53.3℃,Mg~(2+)濃度1.5 m M,rTaq酶0.25μL,引物0.4μM,d NTP濃度0.1 m M。其敏感性為8 CFU·m L~(-1),比細(xì)菌分離試驗(yàn)敏感1 000倍;與大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、酵母菌、隱秘桿菌和克雷伯氏菌均無交叉反應(yīng);與試管凝集試驗(yàn)檢測布魯氏菌病的陽性符合率是100%,陰性符合率是86.36%。試驗(yàn)建立的套式PCR方法可用于檢測奶樣中布魯氏菌。
【作者單位】： 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 布魯氏菌 套式PCR 奶樣 奶牛
【基金】：國家科技計(jì)劃課題(2012BAD12B05-2)
【分類號】：R155.57
【正文快照】： 布魯氏菌病(Brucellosis)于1859年由Morston首次報(bào)道[1],是目前世界上流行最廣、危害最大的人獸共患病之一[2],給世界的畜牧業(yè)以及人類的健康帶來巨大的威脅,世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)已將其列為需要通報(bào)的動(dòng)物疫病,我國將其列為二類動(dòng)物疫病[3]。 傳統(tǒng)的診斷方法有很多,包括平，

本文編號：752415