本文關鍵詞：高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜法（HPLC-ICP-MS）檢測大鼠組織還原碘酸鉀能力的體外研究

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【摘要】：碘是人體的必需微量元素,對機體生長發(fā)育起著不可或缺的作用。碘缺乏在大多數(shù)國家都被列為重大公共衛(wèi)生問題,實踐證明普及食鹽加碘(USI)是解決這一問題的有效途徑。當前,碘酸鉀和碘化鉀是主要的食鹽碘化劑。由于碘酸鉀具有強氧化性,且必須還原為碘離子才能被機體有效利用。近年來,碘酸鉀碘鹽的安全性問題逐漸引起了學者們的關注,認為碘酸鉀可能會對機體造成氧化損傷。然而,到目前為止,有關碘酸鉀對機體的安全性還沒有定論。本研究首次利用高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜聯(lián)用技術(HPLC-ICP-MS)對組織內的碘酸根與碘離子進行分析,研究了大鼠不同組織體外還原碘酸鉀的能力。通過檢測樣品中的總抗氧化能力和還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH),揭示不同劑量碘酸鉀對組織的氧化還原能力的影響。本研究為碘酸鉀在體內還原過程的研究奠定了實驗基礎,以期日后為碘酸鉀的安全性評價提供參考依據(jù)。目的建立生物體組織勻漿液中碘酸根和碘離子的HPLC-ICP-MS分析方法；研究大鼠肝臟、腎臟、甲狀腺組織及血漿還原碘酸根的能力；初步探討碘酸鉀對生物體抗氧化能力和NADPH含量的影響,為碘酸根體內還原過程的研究奠定基礎。方法選用健康12周SPF級Wistar大鼠12只,雌雄各半,正常喂養(yǎng),收集肝臟、腎臟、甲狀腺組織及血液,并分離血漿。1.對HPLC-ICP-MS儀器參數(shù)、流動相溶液、流速等進行調整,摸索樣品前處理方法過程中純化柱、穩(wěn)定介質、溶液配比等條件,對組織、碘酸鉀濃度與孵育時間點進行探索,建立實驗體系。利用碘酸鉀、碘離子標準溶液加標回收率來評價結果的準確度與精密度。2. HPLC-ICP-MS分析法測定肝、腎、甲狀腺及血漿在不同孵育時間(0、7.5、15、30、60 min)對碘酸鉀的還原情況。3. ABTS法測定組織與血漿中總抗氧化能力,并加入不同劑量碘酸鉀(0、0.25、0.5、1、2 μg,觀察總抗氧化能力的變化情況。4. NADPH紅色熒光法測定組織加入不同劑量碘酸鉀(0、0.25、0.5、1、2μg)后, NADPH含量的變化情況。結果1.本研究建立的HPLC-ICP-MS聯(lián)用方法具有良好的線性關系,相關系數(shù)均大于0.9990。對碘形態(tài)的分離效果好,靈敏度高、回收率高,加標回收率碘酸根在97.0%～105.3%之間,碘離子在95.50%～102.8%之間。精密度好,樣品值相對標準偏差均小于3.0%。檢出限碘酸根為0.17μg/L,碘離子為0.12μg/L2.各類型樣品孵育不同時間點的碘酸根還原程度差異整體均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與未孵育相比,碘酸根的還原程度顯著增加。組織樣品整體變化趨勢為先迅速增加再趨于平緩。隨著孵育時間延長至孵育60 min為止,碘酸根的還原程度在組織中分別為：肝從15%增至99%,腎從16%增至84%,甲狀腺從4%增至31%；而在血漿中變化趨勢不同,從沒有還原逐漸增加至還原13%。碘酸根還原程度在性別之間存在差異,肝組織和血漿在雄性組比雌性組還原程度高,各時間差異存在統(tǒng)計學意義(P0.05)；腎組織僅在孵育60 min時雄性組高于雌性組(P0.05)；而甲狀腺碘酸根還原程度性別之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),但外源峰的比例各時間點均為雌性高于雄性(P0.05)。3.各組織總抗氧化能力基礎值均有統(tǒng)計學差異(P0.05)。性別之間差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。雌性大鼠組織總抗氧化能力依次是肝組織腎組織甲狀腺,而雄性為甲狀腺肝組織腎組織。加入不同劑量碘酸鉀后,各組織總抗氧化能力均下降,整體差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。但消耗碘酸鉀后,總抗氧化能力減少量在肝、腎中是雌性多于雄性,而甲狀腺是雄性多于雌性。血漿結果為雌性大鼠總抗氧化能力高于雄性(P0.05),但碘酸鉀僅使雄性總抗氧化能力下降(P0.05),對雌性無影響(P0.05)。4.各組織間NADPH基礎含量均有統(tǒng)計學差異(P0.05)。性別之間差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。雌性大鼠組織是肝腎≈甲狀腺,而雄性為肝腎甲狀腺。加入不同劑量碘酸鉀后,僅肝臟勻漿NADPH含量隨著碘酸鉀劑量增加而明顯減少(P0.05)。結論1.本研究首次成功建立了大鼠組織勻漿中碘酸根與碘離子分型的高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜方法,并將其成功運用于組織液中碘酸根和碘離子的分型研究。2.大鼠肝臟、腎臟、甲狀腺和血漿均可在體外還原碘酸鉀。組織與血漿對碘酸鉀的還原能力存在差異,因而孵育不同時間點的還原程度變化趨勢不一致。等量組織勻漿還原能力為：肝腎甲狀腺。性別間還原能力也存在一定差異,肝、腎、血漿均是雄性大鼠更強,而甲狀腺則是雌性還原力更高。3.碘酸鉀可導致大鼠組織總抗氧化能力下降,下降程度依次為肝腎甲狀腺。肝、腎、血漿總抗氧化物質含量為雌性高于雄性,但整體還原活性為雄性組雌性組；甲狀腺則相反,雌性組還原活性更高。不同劑量碘酸鉀對雌性大鼠血漿的總抗氧化能力無影響。4.碘酸鉀能夠降低大鼠肝臟組織中NADPH含量,但對腎臟和甲狀腺無明顯影響。碘酸根在組織中的還原反應除了消耗NADPH外,可能還依賴其它的還原物質。
【關鍵詞】：高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜 碘酸鉀 碘形態(tài) 總抗氧化能力 還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸
【學位授予單位】：中國疾病預防控制中心
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R115
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表6-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-18
• 第一部分 HPLC-ICP-MS測定組織勻漿中碘酸根和碘離子方法的建立18-35
• 1.1 實驗材料和方法18-21
• 1.1.1 實驗儀器及設備18-19
• 1.1.2 主要試劑和溶液19
• 1.1.3 電感耦合等離子體質譜條件19-20
• 1.1.4 高效液相色譜條件20
• 1.1.5 樣品前處理方法20
• 1.1.6 食品碘檢測方法20-21
• 1.1.7 結果計算21
• 1.2 實驗結果與討論21-34
• 1.2.1 高效液相色譜與電感耦合等離子體質譜條件優(yōu)化21-22
• 1.2.2 標準曲線線性范圍22-23
• 1.2.3 前處理條件的優(yōu)化23-30
• 1.2.4 體外實驗孵育條件與時間點探索30-32
• 1.2.5 HPLC-ICP-MS測定組織勻漿中碘酸根和碘離子體系的確立32-34
• 1.3 小結34-35
• 第二部分 HPLC-ICP-MS檢測不同組織勻漿液和血漿還原碘酸根的能力35-47
• 2.1 實驗材料和方法35-36
• 2.1.1 實驗儀器及設備35
• 2.1.2 實驗動物35-36
• 2.1.3 實驗方法36
• 2.1.4 數(shù)據(jù)分析方法36
• 2.2 實驗結果36-44
• 2.2.1 肝組織勻漿檢測結果37-38
• 2.2.2 腎組織勻漿檢測結果38-40
• 2.2.3 甲狀腺組織勻漿檢測結果40-42
• 2.2.4 血漿檢測結果42-44
• 2.3 討論44-46
• 2.4 小結46-47
• 第三部分 碘酸鉀對大鼠抗氧化能力相關指標的影響47-63
• 3.1 實驗材料和方法47-50
• 3.1.1 主要實驗儀器及試劑47
• 3.1.2 實驗動物47
• 3.1.3 實驗方法47-50
• 3.1.4 數(shù)據(jù)分析方法50
• 3.2 實驗結果50-58
• 3.2.1 標準曲線結果50-51
• 3.2.2 各組織中總抗氧化能力檢測結果51
• 3.2.3 不同劑量KIO_3對組織抗氧化能力影響51-53
• 3.2.4 不同劑量KIO_3對血漿抗氧化能力影響53-54
• 3.2.5 各組織中NADPH含量檢測結果54-55
• 3.2.6 不同劑量KIO_3對組織中NADPH含量的影響55-58
• 3.3 討論58-62
• 3.3.1 碘酸鉀對總抗氧化能力的影響58-60
• 3.3.2 碘酸鉀對NADPH含量的影響60-62
• 3.4 小結62-63
• 總結63-64
• 創(chuàng)新點64
• 研究局限性與下一步計劃64-65
• 參考文獻65-71
• 綜述 碘形態(tài)分析方法研究進展71-84
• 參考文獻78-84
• 致謝84

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本文編號：697948