本文關(guān)鍵詞：三鄰甲苯磷酸酯對大鼠精原干細胞毒性機制的研究

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【摘要】：目的：三鄰甲苯基磷酸酯（TOCP）在工業(yè)中廣泛應用，并可導致機體的生殖毒性，但確切機制仍不甚完全清楚。本課題通過觀察TOCP對體外培養(yǎng)的大鼠精原干細胞活性的影響，探究TOCP的雄性生殖毒性作用及其相關(guān)機理。 方法：1、用MTT法檢測TOCP和LPC對分離提取的9d雄性SD乳鼠精原干細胞活性的影響；2、用流式細胞儀和RT-PCR檢測TOCP和LPC對大鼠精原干細胞周期的影響；3、用Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測TOCP和LPC對大鼠精原干細胞凋亡的影響；4、用Western blot法檢測TOCP和LPC對大鼠精原干細胞自噬蛋白的影響。 結(jié)果：1、分離提取9d雄性SD乳鼠精原干細胞，分別用不同濃度的TOCP（0mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L和1.0mmol/L）作用于大鼠精原干細胞48h后，MTT法檢測細胞活性，結(jié)果顯示，與對照組相比，TOCP呈濃度依賴式地抑制大鼠精原干細胞活性（P㩳0.05）。2、分別用不同濃度的TOCP（0mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L和1.0mmol/L）作用于大鼠精原干細胞48h后，用流式細胞儀檢測細胞周期，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TOCP對大鼠精原干細胞周期無明顯影響；RT-PCR法結(jié)果顯示，TOCP對細胞內(nèi)相關(guān)周期蛋白P21、P27和CyclinD1mRNA的表達也無明顯的影響。3、Annexin V-FITC/PI雙染色法顯示，與對照組（0mmol/LTOCP）相比，不同濃度（0.25mmol/L、0.5mmol/L和1.0mmol/L）的TOCP處理精原干細胞48h后，大鼠精原干細胞凋亡無明顯影響。4. Westernblot法檢測發(fā)現(xiàn)，TOCP可使大鼠精原干細胞中的自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例明顯增加，并且使自噬蛋白Atg5和Beclin1表達量也顯著增加。5、RT-PCR結(jié)果顯示，TOCP呈濃度依賴式地抑制大鼠精原干細胞內(nèi)NTE mRNA的表達。6、分別用不同濃度的LPC（0μmol/L、20μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）作用于大鼠精原干細胞48h后，MTT法檢測細胞活性，，結(jié)果顯示與對照組相比，LPC呈濃度依賴式地抑制大鼠精原干細胞活性（P㩳0.05）。7、分別用不同濃度的LPC（0μmol/L、20μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）作用于大鼠精原干細胞48h后，用流式細胞儀檢測細胞周期，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LPC對大鼠精原干細胞周期無明顯影響；RT-PCR法結(jié)果顯示，LPC對細胞內(nèi)相關(guān)周期蛋白P21、P27和Cyclin D1mRNA的表達也無明顯的影響。8、Annexin V-FITC/PI雙染色法顯示，與對照組（0μmol/L LPC）相比，用不同濃度LPC（20μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）處理精原干細胞48h，對大鼠精原干細胞凋亡無明顯影響。9、RT-PCR和Westernblot法結(jié)果顯示，LPC對大鼠精原干細胞內(nèi)NTE蛋白及其mRNA的表達無明顯影響。10、Western blot法檢測發(fā)現(xiàn)，LPC可使大鼠精原干細胞中的自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例明顯增加，并且使自噬蛋白Atg5和Beclin1表達量也顯著增加。 結(jié)論：1、TOCP可誘導大鼠精原干細胞自噬并抑制其活性，但對大鼠精原干細胞的周期和凋亡無明顯影響；2、 LPC可誘導大鼠精原干細胞自噬并抑制其活性，但對大鼠精原干細胞周期和凋亡無明顯影響；3、TOCP可抑制大鼠精原干細胞內(nèi)NTE mRNA表達，但LPC對大鼠精原干細胞內(nèi)NTE mRNA表達無明顯影響；提示：TOCP可能是通過NTE/LPC途徑誘導大鼠精原干細胞自噬，從而影響細胞活性。
【關(guān)鍵詞】：三磷甲苯磷酸酯 精原干細胞 神經(jīng)病靶酯酶 溶血磷脂酰膽堿1
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料與方法12-23
• 2.1 材料12-15
• 2.1.1 動物12
• 2.1.2 主要試劑12-13
• 2.1.3 主要儀器13-14
• 2.1.4 主要試劑及藥物的配制14-15
• 2.2 方法15-23
• 2.2.1 分離提取大鼠精原干細胞15
• 2.2.2 MTT 法檢測細胞活性15-16
• 2.2.3 流式細胞儀檢測細胞周期16
• 2.2.4 Annexin V-FITC/PI 雙染色法檢測細胞凋亡16
• 2.2.5 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應檢測細胞基因表達16-18
• 2.2.6 蛋白印跡法檢測細胞自噬18-22
• 2.2.7 統(tǒng)計處理22-23
• 第3章 結(jié)果23-35
• 3.1 TOCP 對精原干細胞活性的影響23
• 3.2 TOCP 對精原干細胞周期的影響23-24
• 3.3 TOCP 對精原干細胞周期蛋白 mRNA 表達的影響24-25
• 3.4 TOCP 對精原干細胞凋亡的影響25-26
• 3.5 TOCP 對精原干細胞自噬的影響26-27
• 3.6 TOCP 對精原干細胞內(nèi) NTE mRNA 表達的影響27-28
• 3.7 LPC 對精原干細胞活性的影響28-29
• 3.8 LPC 對精原干細胞周期的影響29-30
• 3.9 LPC 對精原干細胞周期蛋白 mRNA 表達的影響30-31
• 3.10 LPC 對精原干細胞凋亡的影響31-32
• 3.11 LPC 對精原干細胞內(nèi) NTE 蛋白及 mRNA 表達的影響32-33
• 3.12 LPC 對精原干細胞自噬的影響33-35
• 第4章 討論35-41
• 4.1 TOCP 對大鼠精原干細胞活性的影響35-36
• 4.2 TOCP 對大鼠精原干細胞周期的影響36-37
• 4.3 TOCP 對細胞凋亡的影響37
• 4.4 TOCP 對大鼠精原干細胞影響自噬的37-38
• 4.5 LPC 對大鼠精原干細胞自噬的影響38-40
• 4.6 展望40-41
• 第5章 結(jié)論41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻43-47
• 綜述47-51
• 參考文獻50-51

【參考文獻】

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1 張基美,岳良臣,杜永鋒,仇寶林,郭寶科,李增民,李慧展,楊家林;亞急性三鄰甲苯磷酸酯中毒74例臨床分析[J];勞動醫(yī)學;1997年03期

本文編號：697633