本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇在砷誘導(dǎo)大鼠肝氧化應(yīng)激中的作用研究

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【摘要】：砷是一種廣泛存在于環(huán)境中的污染物和致癌物。然而,自古以來人們恰恰利用砷的毒性來治療疾病和防治蟲害。同時(shí),砒霜(Arsenic trioxide,As2O3)也被認(rèn)為是早幼粒細(xì)胞白血病(Acute Promyelocytic Leukemia,APL)的良藥,然而在使用As2O3治療APL的過程中,會(huì)出現(xiàn)明顯的肝毒性。因此,如何有效的降低砷暴露人群的砷毒性以及治療過程中的毒副作用成為了國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)課題。目前,關(guān)于砷的毒性機(jī)制國內(nèi)外研究結(jié)果顯示:誘導(dǎo)自由基(Reactive oxygen species,ROS)的產(chǎn)生在毒性研究中處于核心位置,因其伴隨毒性的整個(gè)過程。而大量的研究資料表明,抗氧化劑的使用可以有效地降低過多自由基的產(chǎn)生。白藜蘆醇(Resveratrol,RES)化學(xué)名稱為(E)-3,5,4-三羥基二苯乙烯,屬于非黃酮類多酚化合物。在植物中,RES會(huì)在微生物感染、過度紫外線照射和疾病感染時(shí)產(chǎn)生,因此又屬于植物素。大量的研究證實(shí)RES具有抗炎、自由基清除、心血管保護(hù)、抗腫瘤和抗衰老等多種生物學(xué)活性。因此,本研究運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù),通過體內(nèi)(正常健康大鼠、砷暴露大鼠、RES處理大鼠及同時(shí)處理大鼠)和體外(原代肝細(xì)胞、砷暴露肝細(xì)胞、RES添加處理肝細(xì)胞及同時(shí)處理肝細(xì)胞)兩條途徑,重點(diǎn)評(píng)估砷暴露后大鼠肝臟的氧化應(yīng)激、砷蓄積和肝細(xì)胞凋亡等情況,以及RES對(duì)其的影響。以8周Wistar大鼠為研究對(duì)象,通過分別隔日尾靜脈注射8 mg/kg RES和3 mg/kg As2O3,且聯(lián)合給藥組RES先于As2O3 1h注射,共4次,持續(xù)到第8天,建立體內(nèi)砷暴露模型。我們發(fā)現(xiàn):砷暴露大鼠的血液中出現(xiàn)以丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶明顯升高的肝損傷和ROS(750.29±81.33 Unites/mL)、脂質(zhì)物氧化物丙二醛(4.9±0.67μmol/L)過高濃度和超氧化物歧化酶(7.42±1.14Unites/mL)、谷胱甘肽過氧化物酶(215.93±35.19 Unites/L)、過氧化氫酶(3.66±0.32Unites/mL)過低濃度,以這些為主要標(biāo)志的氧化應(yīng)激性損傷以及典型的中毒性病理損傷和高出正常組約7倍的砷蓄積;然而,預(yù)防性給予RES的大鼠肝組織氧化性和病理性損傷情況均得到緩解且砷的蓄積量也顯著降低(p0.05)。為了進(jìn)一步探索As2O3誘導(dǎo)肝細(xì)胞氧化應(yīng)激是否能引發(fā)凋亡以及明確凋亡的路徑,我們又建立了體外細(xì)胞模型。本試驗(yàn)采用原位膠原二步灌流法獲取大鼠原代肝細(xì)胞,通過分別添加As2O3和RES建立大鼠原代肝細(xì)胞試驗(yàn)?zāi)Ｐ�。試�?yàn)結(jié)果表明,As2O3添加影響了原代肝細(xì)胞的貼壁生長、造成了肝細(xì)胞明顯的病理性損傷和誘導(dǎo)了肝細(xì)胞的氧化應(yīng)激,同時(shí),肝細(xì)胞的線粒體凋亡路徑被激活,主要表現(xiàn)為以Fax/TNF為受體的凋亡在砷暴露前后以及給予RES并無明顯性差異,而以Bcl-2和Bax為線粒體的凋亡在砷暴露后均顯著性升高,且Bcl-2/Bax的比率明顯下降,但Caspase-3的基因表達(dá)差異性卻不顯著。鑒于Caspase-3激活的凋亡是受其活性蛋白調(diào)控,又對(duì)其活性進(jìn)行了檢測(cè)。與正�？瞻捉M相比,高砷環(huán)境下Caspase-3的活性提高了近10倍,而提前RES處理其活性可減緩20%的升高。在我們的整個(gè)試驗(yàn)過程中,單獨(dú)處理RES對(duì)肝組織和肝細(xì)胞均無明顯可見差異。綜上所述:給予低劑量的RES可以有效地降低As2O3誘導(dǎo)肝臟氧化性損傷,肝細(xì)胞凋亡和砷蓄積,從而降低了肝臟的病理性損傷,同時(shí),RES也可以降低As2O3通過Bcl-2/Bax線粒體路徑誘導(dǎo)的凋亡。由此可見預(yù)處理的RES降低了以藥物砷對(duì)正常健康大鼠誘導(dǎo)產(chǎn)生的氧化應(yīng)激、肝細(xì)胞凋亡,從而減緩了肝臟損傷。但是RES是否調(diào)控與凋亡密切相關(guān)的自噬等問題還需進(jìn)一步明確。本研究有望在砷和RES協(xié)同抗腫瘤的臨床應(yīng)用和砷污染的防治問題提供理論依據(jù)和實(shí)踐基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：砷 白藜蘆醇 肝 氧化應(yīng)激 凋亡
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1 前言12-17
• 1.1 砷12-14
• 1.1.1 砷的應(yīng)用12-13
• 1.1.2 砷的藥理作用13-14
• 1.2 白藜蘆醇14-15
• 1.2.1 RES的生物活性14-15
• 1.2.2 RES的抗癌作用15
• 1.3 目的與意義15-17
• 2 材料與方法17-24
• 2.1 材料17-18
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物17
• 2.1.2 試驗(yàn)藥品17
• 2.1.3 主要試驗(yàn)試劑與配制17-18
• 2.1.4 試驗(yàn)儀器與設(shè)備18
• 2.2 方法18-23
• 2.2.1 試驗(yàn)方案18-19
• 2.2.2 樣品采集19-20
• 2.2.3 大鼠肝毒性檢測(cè)20-21
• 2.2.4 大鼠肝細(xì)胞毒性檢測(cè)21-23
• 2.3 數(shù)據(jù)處理23-24
• 3 結(jié)果24-36
• 3.1 RES在砷誘導(dǎo)的肝毒性中的作用24-29
• 3.1.1 砷誘導(dǎo)大鼠肝毒性24-26
• 3.1.2 RES在砷誘導(dǎo)大鼠肝毒性中的作用26-29
• 3.2 RES在砷誘導(dǎo)的肝細(xì)胞毒性中的作用29-36
• 3.2.1 原代分離培養(yǎng)肝細(xì)胞的鑒定29-30
• 3.2.2 砷誘導(dǎo)大鼠肝細(xì)胞肝毒性30-33
• 3.2.3 RES在砷誘導(dǎo)大鼠的肝毒性中的作用33-36
• 4 討論36-41
• 4.1 RES在砷誘導(dǎo)的大鼠肝毒性中的作用36-38
• 4.2 RES在砷誘導(dǎo)的大鼠肝細(xì)胞中毒性的作用38-39
• 4.3 展望39-41
• 5 結(jié)論41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 附錄50-53
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文53

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 梁冰;張愛華;;谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶與砷中毒關(guān)系的研究進(jìn)展[J];癌變·畸變·突變;2010年04期

2 趙艷霞;張廣梅;趙協(xié)慧;格日力;;高脂飲食對(duì)模擬低氧環(huán)境SD大鼠肺組織eNOS/NO的影響[J];青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年01期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 宋曉麗;無機(jī)砷甲基化及人砷甲基化酶催化機(jī)制[D];南京大學(xué);2010年

2 趙艷霞;高脂飲食對(duì)低氧環(huán)境大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能的影響[D];青海大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 于雅晴;二甲胂酸誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞SGC-7901凋亡的研究[D];蘇州大學(xué);2006年

2 蘇郁潔;金屬硫蛋白在原核生物中的表達(dá)及在環(huán)境治理中的應(yīng)用[D];山東大學(xué);2007年

3 徐磊;人攝入海產(chǎn)品中的砷與飲水中的無機(jī)砷尿砷代謝產(chǎn)物的比較[D];中國醫(yī)科大學(xué);2009年

4 張智;食品包材中重金屬殘留安全性評(píng)價(jià)及遷移研究[D];天津科技大學(xué);2010年

5 南楠;砷、鋅對(duì)雄性大鼠生殖功能的聯(lián)合作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：652729