發(fā)布時(shí)間：2017-08-05 10:10

  本文關(guān)鍵詞：基于多功能適配體探針檢測鎘和銀的新原理新方法研究

  更多相關(guān)文章： 多功能適配體探針 構(gòu)象轉(zhuǎn)換 鎘 銀 熒光

【摘要】：鎘和銀是環(huán)境中極為常見的有毒重金屬污染物,他們對(duì)人體健康的危害已經(jīng)引起了人們的廣泛關(guān)注�，F(xiàn)行檢測鎘和銀的方法,有些需使用昂貴的儀器和熟練的操作者,或者需要繁瑣、費(fèi)時(shí)的樣品預(yù)處理程序。因此,建立簡便、靈敏、特異的檢測鎘和銀的新技術(shù)和新方法,對(duì)于保護(hù)生態(tài)環(huán)境、促進(jìn)人們身體健康具有重要意義。基于核酸適配體探針、建立重金屬生物傳感方法是近年來新興的研究領(lǐng)域。有報(bào)道鎘適配體(Cd 4)能與鎘離子特異性結(jié)合。我們發(fā)現(xiàn),這個(gè)適配體經(jīng)適當(dāng)修飾、構(gòu)建的多功能適配體探針,既能用于鎘的靈敏檢測,又能用作銀的特異性識(shí)別元件,還能充當(dāng)信號(hào)報(bào)告分子。據(jù)此,建立了基于特異的、多功能的核酸適配體探針檢測鎘和銀的兩種熒光生物傳感方法。本文第一章緒論部分闡述了鎘和銀對(duì)人類的危害和主要檢測方法及其進(jìn)展,介紹了核酸適配體在金屬離子檢測中的應(yīng)用和本課題擬研究的主要內(nèi)容。本文第二章基于鎘的特異性、多功能適配體探針(cadmium and silver specific aptamer probe,CSAP),建立了檢測鎘的新型熒光生物傳感方法。在HEPES緩沖溶液(pH 7.3)中,Cd~(2+)的加入能夠引起CSAP發(fā)生構(gòu)象轉(zhuǎn)換并猝滅熒光,根據(jù)體系熒光值的變化可定量檢測Cd~(2+)。利用圓二色譜、熒光和紫外等光譜技術(shù)證實(shí)了CSAP探針發(fā)生構(gòu)象轉(zhuǎn)換的機(jī)制。Cd~(2+)的濃度在7.19×10~(~(-9)) mol·L~(-1)~5.00×10~(-6) mol·L~(-1)范圍內(nèi)與體系的熒光強(qiáng)度改變值呈良好的線性關(guān)系;Cd~(2+)的檢出限達(dá)到了2.15×10~(~(-9)) mol·L~(-1),大大低于已經(jīng)報(bào)道的方法。該方法已成功應(yīng)用于環(huán)境樣品中鎘的檢測。與傳統(tǒng)檢測方法比較,新建方法具有靈敏度高、特異性好和成本低廉等優(yōu)點(diǎn),為生物醫(yī)學(xué)、毒理學(xué)和環(huán)境科學(xué)研究提供了新思路、新技術(shù)和新方法。本文第三章基于銀離子誘導(dǎo)的多功能適配體探針(CSAP)構(gòu)象改變,建立了一種新穎的、熒光猝滅法檢測銀離子的新方法。在HEPES緩沖液中,Ag+能特異性的誘導(dǎo)CSAP發(fā)生分子內(nèi)的折疊,形成穩(wěn)定的莖環(huán)結(jié)構(gòu),促使5’端修飾的四個(gè)鳥嘌呤(G4)堿基靠近3’端的熒光基團(tuán)6 FAM,發(fā)生光誘導(dǎo)的電子轉(zhuǎn)移,引起體系的熒光猝滅。該方法在銀離子濃度為2.13×10~(~(-9)) mol·L~(-1)~1.00×10~(-7) mol·L~(-1)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,線性回歸方程為?F=28.46+5.960c(×10 9 mol·L~(-1)),r=0.9979,檢出限為6.40×10~(-10) mol·L~(-1)。與普通的分子信標(biāo)比較,該策略避免了標(biāo)記猝滅劑步驟,不需要昂貴的儀器。因而,更加簡便、經(jīng)濟(jì)和實(shí)用。
【關(guān)鍵詞】：多功能適配體探針 構(gòu)象轉(zhuǎn)換 鎘 銀 熒光
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114;TP212.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 主要縮寫符號(hào)與對(duì)照12-13
• 第一章 緒論13-25
• 1.1 研究意義13-14
• 1.1.1 鎘及其危害13
• 1.1.2 銀及其危害13-14
• 1.2 鎘和銀的主要檢測方法14-17
• 1.2.1 鎘檢測方法概述14-16
• 1.2.2 銀檢測方法概述16-17
• 1.3 核酸適配體17-19
• 1.4 分子信標(biāo)19-22
• 1.4.1 分子信標(biāo)設(shè)計(jì)19-20
• 1.4.2 分子信標(biāo)的影響因素20
• 1.4.3 分子信標(biāo)的作用機(jī)制20-22
• 1.5 課題構(gòu)思和研究內(nèi)容22-25
• 第二章 基于多功能核酸適配體探針檢測鎘25-41
• 2.1 引言25-26
• 2.2 材料和方法26-27
• 2.2.1 試劑26
• 2.2.2 儀器26-27
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法27
• 2.3 結(jié)果與討論27-38
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與傳感原理27-29
• 2.3.2 傳感機(jī)制探討29-33
• 2.3.3 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化33-36
• 2.3.4 測定方法的線性范圍、檢出限及精密度36-37
• 2.3.5 測定方法的選擇性37-38
• 2.4 樣品測定38
• 小結(jié)38-41
• 第三章 基于多功能核酸適配體探針熒光猝滅法檢測銀41-55
• 3.1 引言41-42
• 3.2 材料和方法42-43
• 3.2.1 試劑42
• 3.2.2 儀器42
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)方法42-43
• 3.3 結(jié)果與討論43-53
• 3.3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和傳感原理43-44
• 3.3.2 傳感機(jī)制探討44-49
• 3.3.3 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化49-51
• 3.3.4 測定方法的線性范圍、檢出限及檢出限51-52
• 3.3.5 測定方法的選擇性52-53
• 3.4 樣品測定53-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-63
• 綜述63-71
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果71-73
• 致謝73

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