本文關(guān)鍵詞：食品中志賀活菌疊氮溴乙錠實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)研究

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【摘要】：目的利用疊氮溴乙錠(ethidium monoazide bromide,EMA)實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù),建立一種簡(jiǎn)便、快速、特異、靈敏的在食品中檢測(cè)志賀活菌的方法。方法根據(jù)志賀菌ipa H基因保守序列設(shè)計(jì)特異性引物和探針。用不同EMA濃度、不同光照次數(shù)優(yōu)化樣品EMA前處理?xiàng)l件。用已知菌驗(yàn)證志賀活菌檢測(cè)的敏感性和志賀死菌檢測(cè)的抑制性。用31株志賀菌、26株單增李斯特菌、24株沙門(mén)菌、25株副溶血弧菌、11株阪崎腸桿菌、10株致病性大腸埃希菌和1株大腸埃希菌驗(yàn)證方法的特異性和穩(wěn)定性。同時(shí)用本研究方法和常規(guī)分離培養(yǎng)法,對(duì)30件模擬樣品進(jìn)行實(shí)樣驗(yàn)證。結(jié)果志賀活菌EMA實(shí)時(shí)熒光PCR方法的循環(huán)閾值(Ct)=32.10~3.19×log(菌量)(R2=0.994)。最低檢測(cè)濃度為2.20 CFU/反應(yīng)。對(duì)死菌DNA抑制效率≥99.97%。31株志賀菌Ct值最低為15.04,最高為26.54,而97株非志賀菌的Ct值均35或無(wú)Ct值(呈一條直線)。重復(fù)試驗(yàn)Ct值變異系數(shù)3。30件模擬樣品采用本研究方法和常規(guī)分離培養(yǎng)法的檢測(cè)結(jié)果一致,但采用EMA實(shí)時(shí)熒光PCR方法耗時(shí)不超過(guò)7.5 h,而常規(guī)分離培養(yǎng)方法則需要3~5 d。結(jié)論 EMA實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)是一種快速簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高、僅檢測(cè)志賀活菌的方法,建議在食品檢測(cè)中推廣應(yīng)用。
【作者單位】： 浙江省疾病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 食品 志賀菌 疊氮溴乙錠 實(shí)時(shí)熒光PCR
【基金】：浙江省公益類科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015C37058)~~
【分類號(hào)】：R155.5
【正文快照】： 作者單位:浙江省疾病預(yù)防控制中心,浙江杭州310051Corresponding author:CHENG Su-yun,Email:llmei@cdc.zj.cn志賀菌可引起細(xì)菌性痢疾和食物中毒,全球每年因志賀菌感染的人次估計(jì)為1.65億,可造成110萬(wàn)人死亡,細(xì)菌性痢疾的發(fā)病率和死亡率均居感染性腹瀉之首位[1]。細(xì)菌性痢疾是

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