本文關(guān)鍵詞：二甲基甲酰胺通過線粒體通路誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞凋亡的實驗研究

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【摘要】：目的探討線粒體通路是否參與了二甲基甲酰胺(DMF)誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞凋亡的過程,以及細(xì)胞氧化還原水平的改變與該與通路的激活是否有關(guān)。方法觀察DMF對H9c2心肌細(xì)胞形態(tài)以及核形態(tài)的影響。用western blotting(WB)檢測不同劑量DMF(0 m M,50 m M,100 m M,200 m M)染毒24h后胞漿內(nèi)全長Caspase-3(Procaspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved caspase-3)、全長Caspase-9(Procaspase-9)、Bax、Bcl-2、細(xì)胞色素C(Cyt-c)水平的改變;檢測200 m M DMF染毒不同時間后(0h,2h,4h,8h,12h,24h)以及4 m M N-乙酰半胱氨酸(NAC)預(yù)作用1h繼而200 m M DMF作用24h后胞漿內(nèi)Cleaved caspase-3,Bcl-2,Cyt-c水平的變化。采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法(IFC)對200 m M DMF染毒不同時間后(0h,2h,4h,8h,12h,24h)以及4 m M NAC干預(yù)1h繼而200 m M DMF染毒24h后細(xì)胞內(nèi)Cyt-c進(jìn)行定位,觀察細(xì)胞內(nèi)Cyt-c的變化動態(tài)。結(jié)果200 m M DMF染毒24h后大部分細(xì)胞皺縮、部分細(xì)胞變圓并脫離培養(yǎng)瓶壁懸浮到培養(yǎng)基中;部分細(xì)胞核染色質(zhì)出現(xiàn)不同程度的濃縮現(xiàn)象。不同劑量DMF(0 m M,50 m M,100 m M,200 m M)染毒24h后胞漿Procaspase-3和Bax水平有升高,Procaspase-9和Bcl-2水平降低,Cleaved caspase-3和Cyt-c水平升高,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Procaspase-3:F=16.11,P=0.0009;Bax:F=60.31,P0.0001;Procaspase-9:F=16.66,P=0.0008;Bcl-2:F=577.8,P0.0001;Cleaved caspase-3:F=23.33,P=0.0003;Cyt-c:F=104.0,P0.0001)。Procaspase-3、Bax在50 m M、100 m M染毒組較對照組升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),200 m M染毒組與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。Procaspase-9在50 m M、100 m M染毒組較與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,200 m M染毒組較對照降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Bcl-2水平在50 m M、100 m M、200 m M染毒組較對照組均降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Cleaved caspase-3和Cyt-c水平在100 m M、200 m M染毒組較對照組升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Cleaved caspase-3/Total caspase-3和Bax/Bcl-2比值增加,100 m M,200 m M組較對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。200 m M DMF染毒不同時間后(0h,2h,4h,8h,12h,24h)胞漿內(nèi)Cleaved caspase-3,Cyt-c水平升高,Bcl-2水平降低,組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(Cleaved caspase-3:F=503.7,P0.0001;Cyt-c:F=51.42,P0.0001;Bcl-2:F=73.37,P0.0001)。Cleaved caspase-3水平在200 m M DMF染毒后各時間點較對照組均升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Cyt-c水平在200 m M DMF染毒2h,4h,8h時間點與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,12h、24h時間點較對照組升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Bcl-2水平在在200 m M DMF染毒后各時間點較對照組降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4 m M NAC干預(yù)1h繼而200 m M DMF染毒24h、200 m M DMF染毒24h、4 m M NAC單獨干預(yù)1h和對照組組間Cleaved caspae-3、Cyt-c、Bcl-2水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Cleaved caspase-3:F=28.98,P0.0001;Cyt-c:F=26.14,P=0.0002;Bcl-2:F=18.52,P=0.0006)。4 m M NAC干預(yù)1h繼而200 m M DMF染毒24h后Cleaved caspase-3、Cyt-c水平較200 m M DMF染毒組降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4 m M NAC干預(yù)1h繼而200 m M DMF染毒24h后Bcl-2水平較200 m M DMF染毒組升高,然而差異無統(tǒng)計學(xué)意義。IFC檢測發(fā)現(xiàn)對照組大部分細(xì)胞中Cyt-c呈粒點狀分布在胞漿中,單獨Cyt-c熒光染色可見細(xì)胞核輪廓清晰,隨著染毒時間的延長幾乎所有細(xì)胞的Cyt-c彌散分布于胞漿中,核輪廓越來越模糊。4 m M NAC干預(yù)1h繼而200 m M DMF染毒24h后少部分細(xì)胞胞漿內(nèi)可見Cyt-c隨線粒體呈粒點狀分布,且單獨Cyt-c熒光染色時可見細(xì)胞核輪廓變清晰。結(jié)論DMF染毒后可上調(diào)胞漿中Cleaved caspase-3、Cyt-c水平,下調(diào)Bcl-2水平,Cleaved caspase-3/Total caspase-3以及Bax/Bcl-2比值增加。線粒體通路參與了DMF誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞的凋亡過程,該通路的激發(fā)與心肌細(xì)胞氧化還原水平的改變有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：二甲基甲酰胺 心肌細(xì)胞 凋亡 線粒體通路 N-乙酰半胱氨酸
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R114
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 1 前言10-13
• 2 材料與方法13-21
• 3 結(jié)果21-34
• 3.1 細(xì)胞及細(xì)胞核形態(tài)觀察21-22
• 3.2 線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白檢測22-31
• 3.3 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)對胞內(nèi)Cyt-c定位31-34
• 4 討論34-38
• 5 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 附錄44-45
• 致謝45-46
• 綜述46-57
• 摘要46
• Abstract46-47
• 一、 DMF 代謝與毒性47
• 二、 DMF 毒性47-52
• 三、 DMF 職業(yè)中毒治療與預(yù)防52-53
• 參考文獻(xiàn)53-57

【引證文獻(xiàn)】

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 馬龍;周曉娟;陳靜;董家新;劉義;;二甲基甲酰胺對大鼠肝臟線粒體生理功能的影響[A];第十七屆全國化學(xué)熱力學(xué)和熱分析學(xué)術(shù)會議論文集[C];2014年

2 王潔茹;菅向東;;二甲基甲酰胺接觸性皮炎2例[A];第十三次全國勞動衛(wèi)生與職業(yè)病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

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本文編號：532057