本文關(guān)鍵詞：基于對蝦過敏原致敏模型篩選抗過敏乳酸菌及其調(diào)控機理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：對蝦等水產(chǎn)品食用蛋白的致敏性對食用者的安全健康存在著潛在的威脅,其致敏性的高低主要取決于食用蛋白中過敏原的種類及含量。很多研究表明,乳酸菌能夠有效減緩過敏癥狀,調(diào)節(jié)免疫平衡。然而,有許多問題尚待解決,例如抗過敏菌株的種類及其調(diào)控的機制等。鑒于此,本研究擬以具有較高經(jīng)濟價值的特色物種——南美白對蝦為對象,建立腹腔注射該蝦肌肉蛋白的Balb/c小鼠過敏模型,經(jīng)口灌胃5種乳酸菌,結(jié)合間接ELISA檢測小鼠血清中特異性IgE、IgG1抗體水平以驗證過敏模型的成功建立。通過蘇木素-伊紅／甲苯胺藍(lán)染色以及流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞亞群分化等手段篩選最佳抗過敏乳酸菌,最后通過不同細(xì)胞與芽孢乳酸菌09.712的共培養(yǎng),測定細(xì)胞因子、mRNA表達(dá)量等的變化,研究乳酸菌調(diào)控過敏反應(yīng)的機制。本研究通過比較五種乳酸菌緩解蝦蛋白過敏的作用,為今后篩選具有抗過敏活性的乳酸菌提供依據(jù),同時對于研究乳酸菌的抗過敏作用機制具有參考意義。主要研究結(jié)果如下：1、采用腹腔注射致敏、經(jīng)口灌胃激發(fā)方法建立南美白對蝦肌肉蛋白過敏的Balb/c小鼠動物模型。1.2 mg蝦蛋白劑量組小鼠血清中特異性IgE、IgG1抗體水平增加顯著且組胺含量明顯高于對照組,達(dá)到了 664.08±6.52 ng/mL。小腸蘇木素-伊紅染色和甲苯胺藍(lán)染色切片的形態(tài)學(xué)觀察表明,1.2 mg劑量組小鼠小腸中出現(xiàn)炎癥和上皮結(jié)構(gòu)的破壞,腸內(nèi)肥大細(xì)胞脫顆粒,出現(xiàn)了嚴(yán)重的腸道過敏反應(yīng),證明該過敏模型已成功建立,可用于后續(xù)實驗研究。2、芽孢乳酸菌09.712有效緩解小鼠過敏癥狀,改善腸道形態(tài),抑制肥大細(xì)胞脫顆粒和降低特異性IgE、IgG1抗體水平。另外,流式測定小鼠脾淋巴細(xì)胞T細(xì)胞亞群數(shù)量結(jié)果表明,芽孢乳酸菌09.712促進Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞方向極化,糾正Th1/Th2比值以及增加Treg細(xì)胞數(shù)量,增加Th1型細(xì)胞因子分泌。上述結(jié)果表明,芽孢乳酸菌09.712對于過敏反應(yīng)具有治療作用,可用于后續(xù)研究。3、利用流式細(xì)胞儀分選Treg細(xì)胞、Yh2細(xì)胞和B細(xì)胞,選取芽孢乳酸菌09.712作為實驗菌株,采用體外實驗與上述細(xì)胞共培養(yǎng),蝦肌肉蛋白體外刺激,ELISA法測定細(xì)胞因子含量和抗體分泌量,rt-PCR測定mRNA表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),芽孢乳酸菌09.712抑制IgE分泌,促進IgG4分泌,表明乳酸菌能夠促進抗體轉(zhuǎn)換。另外,芽孢乳酸菌09.712增強Foxp3、TGF-β以及IL-10 mRNA表達(dá),降低Th2型細(xì)胞因子分泌,說明乳酸菌能夠抑制Th2型免疫應(yīng)答,調(diào)控Th1/Th2之間的免疫平衡。體外P815肥大細(xì)胞和芽孢乳酸菌09.712共培養(yǎng)結(jié)果表明,芽孢乳酸菌可直接作用于肥大細(xì)胞并抑制其脫顆粒,減少組胺釋放。
【關(guān)鍵詞】：南美白對蝦 Balb/c小鼠 過敏反應(yīng) 乳酸菌 T細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：浙江工商大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 緒論11-25
• 1.1 食物過敏及其作用機制11-20
• 1.1.1 食物過敏11-16
• 1.1.1.1 食物過敏的流行病學(xué)11-12
• 1.1.1.2 食物過敏類型12-13
• 1.1.1.3 食物過敏機制13-16
• 1.1.2 食物過敏原16-19
• 1.1.3 食物過敏的動物模型19-20
• 1.2 乳酸菌抗過敏及其機制的國內(nèi)外研究現(xiàn)狀20-23
• 1.2.1 乳酸菌20-21
• 1.2.2 乳酸菌的益生作用21
• 1.2.3 乳酸菌在腸道中的免疫機制21-22
• 1.2.4 乳酸菌抗過敏機制的國內(nèi)外研究現(xiàn)狀22-23
• 1.3 本課題主要研究內(nèi)容及意義23-25
• 1.3.1 研究目的及意義23
• 1.3.2 研究內(nèi)容23-24
• 1.3.3 研究技術(shù)路線圖24-25
• 第2章 以對蝦蛋白為過敏原建立Balb/c小鼠致敏模型25-45
• 2.1 前言25
• 2.2 實驗材料與方法25-36
• 2.2.1 實驗對象25
• 2.2.2 主要試劑25-26
• 2.2.3 主要儀器26-27
• 2.2.4 實驗方法27-36
• 2.2.4.1 蝦蛋白浸液的制備27
• 2.2.4.2 蛋白含量測定27-29
• 2.2.4.3 SDS-PAGE電泳29-31
• 2.2.4.4 Balb/c小鼠致敏模型的建立31-32
• 2.2.4.5 小鼠過敏癥狀的得分評價32
• 2.2.4.6 小鼠血清中特異性IgE、IgG1的測定32-34
• 2.2.4.7 小鼠血清中組胺含量的測定34-35
• 2.2.4.8 小鼠腸道形態(tài)學(xué)觀察35-36
• 2.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析36
• 2.3 結(jié)果與分析36-43
• 2.3.1 南美白對蝦肌肉蛋白SDS-PAGE分析36-37
• 2.3.2 小鼠過敏癥狀的得分評價37-38
• 2.3.3 小鼠血清中特異性IgE、IgG1水平的測定38-40
• 2.3.3.1 小鼠血清中特異性IgE水平的測定38-39
• 2.3.3.2 小鼠血清中特異性IgG1水平的測定39-40
• 2.3.4 小鼠血清中組胺含量的測定40-41
• 2.3.5 小鼠腸道形態(tài)學(xué)觀察41-43
• 2.3.5.1 小腸形態(tài)學(xué)觀察41-42
• 2.3.5.2 小腸肥大細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察42-43
• 2.4 討論43-44
• 2.5 本章小結(jié)44-45
• 第3章 不同乳酸菌調(diào)節(jié)過敏反應(yīng)的比較研究45-70
• 3.1 前言45
• 3.2 實驗材料與方法45-52
• 3.2.1 實驗對象45-46
• 3.2.1.1 實驗菌株45-46
• 3.2.1.2 實驗動物46
• 3.2.2 主要試劑46
• 3.2.3 主要儀器46-47
• 3.2.4 實驗方法47-51
• 3.2.4.1 菌種培養(yǎng)47
• 3.2.4.2 南美白對蝦蛋白浸液制備47
• 3.2.4.3 Balb/c小鼠免疫方案47-48
• 3.2.4.4 致敏相關(guān)指標(biāo)的測定48
• 3.2.4.5 脾臟淋巴細(xì)胞提取48-49
• 3.2.4.6 細(xì)胞因子的測定：采用雙抗體夾心ELISA法49-50
• 3.2.4.7 MTT法檢測小鼠淋巴細(xì)胞增殖50
• 3.2.4.8 Balb/c小鼠脾淋巴細(xì)胞T細(xì)胞亞群的測定50-51
• 3.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析51-52
• 3.3 結(jié)果與分析52-68
• 3.3.1 不同乳酸菌對致敏小鼠過敏癥狀的影響52-53
• 3.3.2 不同乳酸菌對致敏小鼠血清中特異性抗體含量的影響53-54
• 3.3.3 不同乳酸菌對致敏小鼠血清中組胺含量的影響54
• 3.3.4 不同乳酸菌對致敏小鼠腸道形態(tài)的影響54-58
• 3.3.4.1 小腸形態(tài)學(xué)觀察55-56
• 3.3.4.2 小鼠空腸肥大細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及完整率56-58
• 3.3.5 不同乳酸菌對致敏小鼠脾淋巴細(xì)胞上清液細(xì)胞因子含量的影響58-63
• 3.3.5.1 小鼠脾淋巴細(xì)胞上清液中IFN-γ含量58-59
• 3.3.5.2 小鼠脾淋巴細(xì)胞上清液中IL-4含量59-61
• 3.3.5.3 小鼠脾淋巴細(xì)胞上清液中IL-5含量61-62
• 3.3.5.4 小鼠脾淋巴細(xì)胞上清液中IL-13含量62-63
• 3.3.6 不同乳酸菌對致敏小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響(MTT)63
• 3.3.7 不同乳酸菌對致敏小鼠細(xì)胞亞群數(shù)量的影響63-67
• 3.3.7.1 Th1細(xì)胞亞群的分化64-65
• 3.3.7.2 Th2細(xì)胞亞群的分化65-66
• 3.3.7.3 Treg細(xì)胞亞群的分化66-67
• 3.3.8 不同乳酸菌對細(xì)胞分化的影響67-68
• 3.4 討論68-69
• 3.5 本章小結(jié)69-70
• 第4章 芽孢乳酸菌09.712緩解蝦蛋白源過敏反應(yīng)的機理初探70-82
• 4.1 前言70
• 4.2 實驗材料與方法70-76
• 4.2.1 實驗對象70
• 4.2.1.1 實驗菌株70
• 4.2.1.2 實驗動物70
• 4.2.2 主要試劑70-71
• 4.2.3 主要儀器71
• 4.2.4 實驗方法71-75
• 4.2.4.1 小鼠脾淋巴細(xì)胞的提取71-72
• 4.2.4.2 Treg細(xì)胞、B細(xì)胞和Th2細(xì)胞分選72
• 4.2.4.3 芽孢乳酸菌09.712與Treg細(xì)胞、Th2細(xì)胞共培養(yǎng)72-73
• 4.2.4.4 芽孢乳酸菌09.712與Treg細(xì)胞、B細(xì)胞共培養(yǎng)73
• 4.2.4.5 芽孢乳酸菌09.712與P815肥大細(xì)胞共培養(yǎng)73
• 4.2.4.6 小鼠脾臟細(xì)胞Foxp3、TGF-β和IL-1O mRNA表達(dá)測定73-75
• 4.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析75-76
• 4.3 結(jié)果與分析76-80
• 4.3.1 Th2細(xì)胞、Treg細(xì)胞和B細(xì)胞分選76-77
• 4.3.2 芽孢乳酸菌09.712對IL-10、Foxp3、TGF-β mRNA表達(dá)的影響77-78
• 4.3.3 芽孢乳酸菌09.712對Th2型細(xì)胞因子的影響78-79
• 4.3.4 芽孢乳酸菌09.712對IgE及IgG_4抗體的影響79
• 4.3.5 芽孢乳酸菌09.712對致敏肥大細(xì)胞的影響79-80
• 4.4 討論80-81
• 4.5 本章小結(jié)81-82
• 第5章 總結(jié)論、創(chuàng)新點及研究展望82-84
• 5.1 總結(jié)論82
• 5.2 創(chuàng)新點82-83
• 5.3 研究展望83-84
• 參考文獻(xiàn)84-90
• 研究生期間發(fā)表論文90-91
• 致謝91-92

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 羅治彬;腸道粘膜SIgA免疫系統(tǒng)的研究進展[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1997年S2期

  本文關(guān)鍵詞：基于對蝦過敏原致敏模型篩選抗過敏乳酸菌及其調(diào)控機理研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：495180