發(fā)布時(shí)間：2017-06-11 02:00

  本文關(guān)鍵詞：基于代謝組學(xué)的圍產(chǎn)期雙酚A暴露對(duì)雄性子代小鼠多巴胺、5-羥色胺和犬尿氨酸代謝通路的長(zhǎng)期影響研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分基于代謝組學(xué)的圍產(chǎn)期雙酚A暴露對(duì)雄性子代小鼠代謝的長(zhǎng)期影響雙酚A (Bisphenol A, BPA)是一類人工合成的具有擬/抗雌激素功能的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,其結(jié)構(gòu)與17p-雌二醇相似,可以通過多種途徑干擾體內(nèi)激素的正常合成和代謝。有研究發(fā)現(xiàn)BPA能通過胎盤屏障,對(duì)新生兒大腦發(fā)育產(chǎn)生影響,但具體的影響機(jī)制尚不清楚。目的：運(yùn)用非靶向代謝組學(xué)方法,對(duì)圍產(chǎn)期雙酚A暴露后的雄性子代小鼠腦組織和血漿樣品進(jìn)行代謝組學(xué)分析,尋找關(guān)鍵的代謝差異物,并且將差異代謝物富集到相關(guān)代謝通路,為后續(xù)研究提供理論依據(jù)。方法：FO代C57BL/6J孕鼠隨機(jī)分成四組,每組10-12只,皮下注射BPA,每天一次連續(xù)給藥,劑量為Control、2μg/kg/d、10μg/kg/d、100μg/kg/d,給藥時(shí)間為圍產(chǎn)期。F1代雄性子鼠自由取食飲水,直至處死。小鼠處死后,取腦組織和血漿樣品,進(jìn)行基于超高效液相色譜串聯(lián)高分辨靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜建立的代謝組學(xué)分析,通過主成分分析、正交偏最小二乘判別分析和單變量統(tǒng)計(jì)分析篩選代謝差異物。結(jié)果：圍產(chǎn)期雙酚A暴露后,雄性子代九月齡小鼠腦組織樣品中,BPA暴露組和對(duì)照組之間獲得了良好分區(qū),總計(jì)17種代謝產(chǎn)物發(fā)生了顯著改變,并主要富集在氨基酸代謝通路和檸檬酸循環(huán)通路。結(jié)論：圍產(chǎn)期雙酚A暴露對(duì)雄性子代小鼠代謝具有長(zhǎng)期影響,干擾小鼠色氨酸代謝、酪氨酸代謝和能量代謝等。第二部分多巴胺、5-羥色胺和犬尿氨酸代謝通路聯(lián)合測(cè)定的靶向代謝組學(xué)方法建立多巴胺、5-羥色胺和犬尿氨酸代謝通路的神經(jīng)活性代謝產(chǎn)物在機(jī)體許多生理學(xué)過程中發(fā)揮重要作用,它們的代謝紊亂和許多疾病相關(guān),如阿爾茲海默病、精神分裂癥、焦慮、抑郁、帕金森病等。這些神經(jīng)活性代謝產(chǎn)物的改變和疾病關(guān)系的研究要求高通量,高靈敏度的分析方法。然而,由于大部分代謝物在生物樣本中的含量低、穩(wěn)定性差、極性高,同時(shí)精確定量檢測(cè)這些代謝產(chǎn)物并不容易。目的：建立并驗(yàn)證一個(gè)基于超高效液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜的靶向代謝組學(xué)方法來同時(shí)定量檢測(cè)這三條代謝通路的主要活性代謝產(chǎn)物。方法：樣品中的代謝物經(jīng)3體積乙腈蛋白沉淀提取后,提取液揮干,進(jìn)行丹磺酰氯衍生,衍生化產(chǎn)物過固相萃取小柱,洗脫液揮干復(fù)溶后,進(jìn)入超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析。色譜柱為Acquity UPLC(?) BEH-C18色譜柱(2.1mm×100mm,1.7μm)。反相色譜分離,梯度洗脫,Target-MS/MS方式定量。結(jié)果：方法線性良好,校正曲線的調(diào)整R2都大于0.990；檢出限在0.04-1ng/mL之間,定量下限在0.08-2 ng/mL之間；日內(nèi)精密度小于9.8%,日間精密度小于8.9%,方法回收率為85.2-114.0%；待測(cè)物在儲(chǔ)存和測(cè)定條件下穩(wěn)定,偏差%在10%以內(nèi)。結(jié)論：本部分實(shí)驗(yàn)建立的靶向代謝組學(xué)方法靈敏、準(zhǔn)確、高通量,可用于同時(shí)定量分析生物樣本中的相關(guān)代謝產(chǎn)物來發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)志物。第三部分基于靶向代謝組學(xué)的圍產(chǎn)期雙酚A暴露對(duì)雄性子代小鼠多巴胺、5-羥色胺和犬尿氨酸代謝通路的長(zhǎng)期影響目的：研究圍產(chǎn)期雙酚A暴露對(duì)雄性子代小鼠多巴胺、5-羥色胺和犬尿氨酸代謝通路的具體影響。方法：應(yīng)用第二部分建立的靶向代謝組學(xué)方法,對(duì)第一部分采集的生物樣品進(jìn)行定量分析。結(jié)果：圍產(chǎn)期暴露于一定劑量BPA,隨著雄性子代小鼠月齡的增大,雄性小鼠腦組織和血漿中DA會(huì)顯著降低；對(duì)于色氨酸通路,雄性子代小鼠將更傾向于將色氨酸向5-羥色胺通路代謝,使犬尿氨酸通路代謝減少。結(jié)論：在圍產(chǎn)期暴露于低于美國(guó)環(huán)保局規(guī)定的安全劑量的BPA,依然會(huì)對(duì)子代產(chǎn)生長(zhǎng)遠(yuǎn)的影響。
【關(guān)鍵詞】：代謝組學(xué) 圍產(chǎn)期 雙酚A 雄性子代 氨基酸代謝 定量分析 多巴胺 犬尿氨酸 5-羥吲哚乙酸 靶向代謝組學(xué) 多巴胺通路 5-羥色胺通路 犬尿氨酸通路 丹磺酰氯衍生 固相萃取 Target-MS/MS
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 第一部分 基于代謝組學(xué)的圍產(chǎn)期雙酚A暴露對(duì)雄性子代小鼠代謝的長(zhǎng)期影響12-22
• 前言12-13
• 材料和方法13-17
• 結(jié)果與討論17-21
• 結(jié)論21-22
• 第二部分 多巴胺、5-羥色胺和犬尿氨酸代謝通路聯(lián)合測(cè)定的靶向代謝組學(xué)方法建立22-43
• 前言22-24
• 材料和方法24-28
• 結(jié)果與討論28-42
• 結(jié)論42-43
• 第三部分 基于靶向代謝組學(xué)的圍產(chǎn)期雙酚A暴露對(duì)雄性子代小鼠多巴胺、5-羥色胺和犬尿氨酸代謝通路的長(zhǎng)期影響43-51
• 前言43
• 材料和方法43
• 結(jié)果與討論43-50
• 結(jié)論50-51
• 小結(jié)51-52
• 參考文獻(xiàn)52-61
• 文獻(xiàn)綜述61-73
• 參考文獻(xiàn)67-73
• 主要縮略詞中英文對(duì)照73-75
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況75-76
• 致謝76

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1 陸海華;基于代謝組學(xué)的圍產(chǎn)期雙酚A暴露對(duì)雄性子代小鼠多巴胺、5-羥色胺和犬尿氨酸代謝通路的長(zhǎng)期影響研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：440464