目的:以載脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠為研究對象,探究孕期砷暴露對雄性子代胰島素抵抗的影響及DNA甲基化的可能機(jī)制。方法:將ApoE^-/-孕鼠隨機(jī)分為對照組和飲水砷暴露組,其中對照組孕鼠在妊娠期8～15天被給予普通的飲用水;而砷暴露組孕鼠則被給予含砷的飲用水（85ppm亞砷酸鈉）,含砷飲用水每3天更換一次,以防止氧化。孕鼠自由分娩,子代小鼠在出生后21天斷奶,給予普通標(biāo)準(zhǔn)飼料和普通飲用水。在雄性子代出生后第8周、16周和24周時進(jìn)行進(jìn)行糖耐量和胰島素耐量實(shí)驗;同時,在第8周和24周用ELISA試劑盒檢測血清中的胰島素、瘦素和脂聯(lián)素等激素的水平;分離胰腺組織,進(jìn)行固定、切片,做胰島素免疫組化染色;分離肝臟組織進(jìn)行基因組DNA、RNA和蛋白的提取,全基因組甲基化試劑盒檢測肝臟全基因組甲基化水平,熒光定量PCR檢測葡萄糖激酶（Gck）、6-磷酸葡萄糖（G6P）和固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c）基因的表達(dá)水平,用Western blot測定葡萄糖激酶（GCK）蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:孕期砷暴露對孕鼠和雄性子代的體重影響不明顯（P&...

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
英文縮略語表
第一章 引言
第二章 材料和方法
    2.1 主要試劑與儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 小鼠的飼養(yǎng)和分組
    2.3 糖耐量(ip GTT)測定
    2.4 胰島素耐量(ip ITT)測定
    2.5 胰島素、脂聯(lián)素、瘦素水平檢測
    2.6 胰腺組織病理學(xué)檢測
        2.6.1 免疫組化染色
    2.7 肝臟基因組甲基化的測定
    2.8 Gck及上下游基因的表達(dá)水平
    2.9 肝臟GCK蛋白的表達(dá)
        2.9.1 肝臟蛋白提取
        2.9.2 SDS-PAGE電泳
        2.9.3 轉(zhuǎn)膜及封閉
        2.9.4 免疫反應(yīng)
    2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
第三章 結(jié)果
    3.1 砷暴露對Apo E-/-孕鼠和子代體重的影響
    3.2 孕期砷暴露對雄性子代糖耐量的影響
    3.3 孕期砷暴露對雄性子代胰島素耐量的影響
    3.5 孕期砷暴露對雄性子代胰島素、瘦素和脂聯(lián)素水平的影響
    3.6 孕期砷暴露對雄性子代胰島β細(xì)胞數(shù)量的影響
    3.7 孕期砷暴露對雄性子代肝臟全基因組甲基化的影響
    3.8 孕期砷暴露對雄性子代肝臟Gck及其上下游基因表達(dá)水平的影響
    3.9 孕期砷暴露對雄性子代GCK蛋白表達(dá)水平的影響
第四章 討論
第五章 結(jié)論
第六章 創(chuàng)新性和局限性
第七章 綜述
參考文獻(xiàn)
作者簡歷



本文編號：4033718