目的探討鋅對(duì)海馬神經(jīng)細(xì)胞MEK/ERK通路的調(diào)控機(jī)制。方法將原代培養(yǎng)乳鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞分為3組。（1）對(duì)照組（Control組）:不加任何處理因素。（2）四吡啶甲基乙二胺[N,N,N',N'-tetrakis（2-pyridylmethyl）ethylenediamine,TPEN]干預(yù)組（TPEN組）:2μmol/L TPEN處理海馬神經(jīng)細(xì)胞24h,以誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細(xì)胞缺鋅。（3）TPEN+5μmol/L Zn組:同時(shí)加入終濃度為2μmol/L TPEN及5μmol/L的Zn SO4。采用Western-Blot法檢測(cè)pMEK,perk,Total-MEK、Total-ERK蛋白表達(dá);免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)[Ca²⁺]_i濃度;分子探針DCFH-DA檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）含量。結(jié)果 （1）與對(duì)照組比較,TPEN組海馬神經(jīng)細(xì)胞上清液中LDH活性明顯升高（P<0.05）;加入5μmol/L Zn后LDH活性顯著降低（P<0.05）。（2）與對(duì)照組比較,TPEN組pMEK及pERK蛋白表達(dá)均明顯下降（P<0.05）;5μmol/L ...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑
    1.2 儀器
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.1 主要溶液配制:
        1.3.2 海馬神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程:
    1.4 細(xì)胞分組及處理
    1.5 方法
        1.5.1 細(xì)胞上清液中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性測(cè)定:
        1.5.2 Western-Blot法檢測(cè)p MEK、p ERK、Total-MEK、Total-ERK蛋白檢測(cè):
        1.5.3 細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i濃度檢測(cè):
        1.5.4細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測(cè):
    1.6 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果
    2.1 缺鋅對(duì)海馬神經(jīng)細(xì)胞上清液中LDH活性的影響(圖1)
    2.2 缺鋅對(duì)海馬神經(jīng)細(xì)胞p MEK及p ERK蛋白表達(dá)的影響(圖2,3)
    2.3 缺鋅對(duì)海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i濃度的影響(圖4)
    2.4缺鋅對(duì)海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響(圖5)
3 討論



本文編號(hào)：4011413