目的探討鋅對海馬神經(jīng)細胞MEK/ERK通路的調(diào)控機制。方法將原代培養(yǎng)乳鼠海馬神經(jīng)細胞分為3組。（1）對照組（Control組）:不加任何處理因素。（2）四吡啶甲基乙二胺[N,N,N',N'-tetrakis（2-pyridylmethyl）ethylenediamine,TPEN]干預(yù)組（TPEN組）:2μmol/L TPEN處理海馬神經(jīng)細胞24h,以誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細胞缺鋅。（3）TPEN+5μmol/L Zn組:同時加入終濃度為2μmol/L TPEN及5μmol/L的Zn SO4。采用Western-Blot法檢測pMEK,perk,Total-MEK、Total-ERK蛋白表達;免疫熒光法檢測細胞內(nèi)[Ca²⁺]_i濃度;分子探針DCFH-DA檢測細胞內(nèi)活性氧（ROS）含量。結(jié)果 （1）與對照組比較,TPEN組海馬神經(jīng)細胞上清液中LDH活性明顯升高（P<0.05）;加入5μmol/L Zn后LDH活性顯著降低（P<0.05）。（2）與對照組比較,TPEN組pMEK及pERK蛋白表達均明顯下降（P<0.05）;5μmol/L ...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑
    1.2 儀器
    1.3 細胞培養(yǎng)
        1.3.1 主要溶液配制:
        1.3.2 海馬神經(jīng)細胞培養(yǎng)過程:
    1.4 細胞分組及處理
    1.5 方法
        1.5.1 細胞上清液中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性測定:
        1.5.2 Western-Blot法檢測p MEK、p ERK、Total-MEK、Total-ERK蛋白檢測:
        1.5.3 細胞內(nèi)[Ca2+]i濃度檢測:
        1.5.4細胞內(nèi)ROS水平檢測:
    1.6 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果
    2.1 缺鋅對海馬神經(jīng)細胞上清液中LDH活性的影響(圖1)
    2.2 缺鋅對海馬神經(jīng)細胞p MEK及p ERK蛋白表達的影響(圖2,3)
    2.3 缺鋅對海馬神經(jīng)細胞內(nèi)[Ca2+]i濃度的影響(圖4)
    2.4缺鋅對海馬神經(jīng)細胞內(nèi)ROS水平的影響(圖5)
3 討論



本文編號：4011413