本研究采用細(xì)胞培養(yǎng)、熒光染色、RNA干擾、MTS分析、Western blotting等細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)及方法,綜合研究了在鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡中,雷公藤紅素的保護(hù)作用；基于鎘激活A(yù)kt/mTOR通路探討了雷公藤紅素抗鎘誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡機(jī)理；進(jìn)一步研究了雷公藤紅素調(diào)控Ca2+和CaMKⅡ在阻滯鎘激活A(yù)kt/mTOR通路及保護(hù)抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡中作用及其分子機(jī)理。結(jié)果如下。1雷公藤紅素抑制鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞[Ca2+]i升高干預(yù)凋亡性細(xì)胞死亡PC12細(xì)胞及原代神經(jīng)元用Celastrold(1μM)預(yù)處理1 h后用Cd(10和20μM)處理8 h或24 h。用Fluo-3/AM探針分析[Ca2+]i熒光強(qiáng)度、MTS分析細(xì)胞活性、Western blot分析Cleaved-caspase-3和Cleaved-PARP蛋白的表達(dá)、DAPI分析細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果表明,Cd能引起細(xì)胞[Ca2+]i熒光強(qiáng)度和凋亡的增加及細(xì)胞活性降低,同時(shí)Cd還能引起Cleaved-caspase-3蛋白和Cleaved-PARP蛋白的表達(dá)增加,用Celastrol預(yù)處理可以逆轉(zhuǎn)Cd引起的這些變化。提示：雷公藤紅...

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖５－３雷公藤紅素阻滯領(lǐng)誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｅｐａｓｅ－３和Ｃｌｅａｃｅｄ－ＰＡＲＰ??

ｎＪｉｉ??Ｃｅｌ?巧?ｔｒｏｌ?１｜ｉＭ?－?＋?－?＋?—?＋??Ｃｄ?｜ｉＭ?０?０?１０?１０?２０?２０??圖５－２雷公藤紅素抑制矯誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡??Ｆｉｇ．?５－２?Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ?ｉｎｈ化ｉｔｅｄ?Ｃｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｎｅｕｒｏｎａｌ?ｃｅｌｌ?ａｐｏｐ化ｓ....

圖６－１雷公藤紅素抑制編巧活的Ａｋｔ／ｍＴＯＲ信號(hào)通路??Ｆｉｇ－?６－１?Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ?ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ?Ｃｄ?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ?乂ｋｔ／ｍＴＯＲ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｆｌｉｗａｙ??

提前制備好１２％的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白膠，掛頤序點(diǎn)樣，跑２０Ｙ），把蛋白膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到ＰＶＤＦ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄ化ｒｄ，?Ｍ２４Ｖ，?９０?ｍｉｎ），用脫脂牛奶（５％）封閉Ｉｈ，用ＩｘＰＢＳＴ洗緣４次，０ｍｉｎ，加入一抗解育過夜（４‘Ｃ），用ｌｘＰＢＳＴ洗涂４次，用....

圖６－３錦化Ａｋｔ表達(dá)増強(qiáng)雷公藤紅素對(duì)鋼誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡抑制作用??Ｆｉｇ．?６－３?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｄｎ－Ａｋｔ?ｅｎｈａｎｃｅｄ?ｉｎｈ化ｉｔｏｒｙ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ??

４Ｅ－ＢＰ１?磯酸化和?Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３?的增力口，Ｃｅｌａｓｔｒｏｉ?和?Ａｋｔ?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ?Ｘ?聯(lián)合對(duì)鋪??引起的Ａｋｔ、和４Ｅ－ＢＰＩ磯酸化和Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３増加的抑制作用更明顯??（圖６－２Ａ）。ＤＡＰＩ實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞調(diào)亡顯示，和....

圖７－１?ＢＡＰＴＡ／ＡＭ加強(qiáng)雷公藤紅素抑制領(lǐng)誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞［Ｃａ２＋］ｉ升高??２＋

Ａｋｔ／ｍＴＯ民通路干預(yù)細(xì)胞調(diào)亡，我們?cè)冢校茫保布?xì)胞和原代神經(jīng)元中，用ＢＡＰＴＡ／ＡＭ??（２０?ｎＭ）預(yù)處理１?１１后再用Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ?（１?＾ｉＭ）預(yù)處理１?ｈ，接著暴露Ｃｄ?（ｌＯ＾ｉＭ）??２４?ｈ。由圖７－１可見，Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ和／或ＢＡＰＴＡ／ＡＭ預(yù)處理凡乎....

本文編號(hào)：3925190