李斯特菌在我們的生活環(huán)境下無(wú)處不在,并且李斯特菌存在于絕大多數(shù)食物食品中。許多國(guó)家已經(jīng)采取了相應(yīng)的控制措施并制定相應(yīng)的準(zhǔn)則,避免因李斯特菌感染而引起疾病。李斯特菌傳統(tǒng)常規(guī)的分離培養(yǎng)法、免疫學(xué)檢測(cè)方法耗時(shí)長(zhǎng),需要特定的酶催化,檢測(cè)靈敏性低,而且只適用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),因此,我們?cè)噲D建立李斯特菌新型檢測(cè)方法,等溫、耗時(shí)短、不需要酶、不需要專業(yè)試驗(yàn)人員操作,適合大眾化檢測(cè)。磁珠結(jié)合等溫雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Hybridization Chain Reaction,HCR)病原菌檢測(cè)法:以磁珠為檢測(cè)平臺(tái),利用夾心結(jié)構(gòu)使抓取探針、待檢測(cè)靶標(biāo)和檢測(cè)探針連接,通過(guò)HCR信號(hào)放大,最后通過(guò)連接的HRP酶催化TMB顯色,實(shí)現(xiàn)肉眼檢測(cè)的可視化。本方法具有高靈敏性,李斯特菌濃度為3×10⁴ CFU/mL,沙門(mén)氏菌最低檢測(cè)濃度為3×10³ CFU/mL,。磁珠結(jié)合納米花病原菌檢測(cè)法:PBS緩沖液條件下,二價(jià)銅和ConA蛋白制備的納米花作為轉(zhuǎn)化信號(hào)標(biāo)記物,偶聯(lián)抗體的磁珠捕獲李斯特菌,進(jìn)一步與納米花結(jié)合,最后通過(guò)納米花釋放銅離子促進(jìn)兩條短核酸片段點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)連結(jié),核酸試紙條實(shí)現(xiàn)可視...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)原理

擴(kuò)增技術(shù)[29，30]實(shí)現(xiàn)目標(biāo)檢測(cè)采用圓形模板和特殊的DNA聚合酶。RCA可分為線性RCA（LRCA）和指數(shù)RCA。其實(shí)現(xiàn)了在圓形模板放大伸長(zhǎng)單引物，從而達(dá)到在pM水平的檢出限。為提高檢測(cè)靈敏度，RCA的各種可行方法已被開(kāi)發(fā)，包括指數(shù)RCA。該方法是最早使用多....

圖1.2雙核酸催化組裝技術(shù)原理圖

在常溫下、無(wú)需輔助酶即可對(duì)靶標(biāo)核酸序列實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大的方法。如圖1.2所示，在包括靶標(biāo)核酸序列和兩個(gè)功能性發(fā)夾結(jié)構(gòu)核酸探針存在的情況下即可發(fā)生CHA反應(yīng)[39,41]。其反應(yīng)原理是基于堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，通過(guò)設(shè)計(jì)并合成的探針H1與H2堿基互補(bǔ)，通過(guò)溫度變化使H1和....

圖1.3核酸雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理圖

8圖1.3核酸雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原理圖1.3HCR反應(yīng)信號(hào)放大技術(shù)的應(yīng)用HCR反應(yīng)是一種新型的常溫下即可反應(yīng)的核酸擴(kuò)增技術(shù)，操作過(guò)程不需要大型儀器，對(duì)環(huán)境要求簡(jiǎn)便，并且耗時(shí)短，操作簡(jiǎn)單不需要高技術(shù)人員，且HCR反應(yīng)過(guò)程中無(wú)需輔助酶的參與，節(jié)約成本，重現(xiàn)性好，實(shí)驗(yàn)性強(qiáng)，因此....

圖2.1磁珠結(jié)合等溫雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法對(duì)病原菌核酸片段檢測(cè)反應(yīng)原理圖

14圖2.1磁珠結(jié)合等溫雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法對(duì)病原菌核酸片段檢測(cè)反應(yīng)原理圖2.1實(shí)驗(yàn)材料和儀器2.1.1菌種腸炎沙門(mén)氏菌和單增李斯特菌均由本實(shí)驗(yàn)室保存。2.1.2主要試劑本實(shí)驗(yàn)所有使用的化學(xué)試劑沒(méi)有進(jìn)行純化處理，均為分析純級(jí)別。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所使用的水都是滅菌的雙蒸水，由上海生....

本文編號(hào)：3921725