【研究目的】探討自噬在甲苯二異氰酸酯誘導(dǎo)人氣道上皮細(xì)胞炎性反應(yīng)及氣道重塑中的作用,為TDI哮喘的發(fā)病機(jī)制研究提供新思路,為進(jìn)一步對職業(yè)性哮喘進(jìn)行預(yù)防和治療提供方向�！狙芯糠椒ā客ㄟ^合成TDI-人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)偶聯(lián)物并用Gutmann法檢測TDI-HSA偶聯(lián)物中TDI的濃度,BCA法檢測TDI-HSA偶聯(lián)物中HSA含量。應(yīng)用不同濃度的TDI-HSA及HSA刺激人支氣管上皮細(xì)胞(16HBE),通過細(xì)胞生存率實(shí)驗(yàn)(CCK-8)確定最高染毒濃度,利用流式細(xì)胞儀、ELISA實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度下16HBE細(xì)胞ROS表達(dá)水平及炎性反應(yīng)水平;利用透射電鏡、Western blot實(shí)驗(yàn)檢測16HBE細(xì)胞暴露于不同濃度TDI-HSA后自噬活化情況。確定最佳染毒濃度后,探討自噬抑制劑3-methyladenine(3-MA)及自噬激動(dòng)劑rapamycin(Rapa)對16HBE細(xì)胞炎性反應(yīng)和氣道重塑的影響。實(shí)驗(yàn)分為五組:溶劑對照組、TDI-HSA組、Rapa組、TDI-HSA+Rapa組和TDI-HSA+3-MA組。CCK-8法檢測各組細(xì)胞存活率;利用透射電鏡、W...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1不同濃度TDI-HSA，HSA對16HBE細(xì)胞存活率的影響

/mL及以下時(shí)，不同劑量的TDI-HSA組或HSA組的細(xì)胞劑量TDI-HSA組和HSA組的細(xì)胞存活率分別比較，差異；提示TDI-HSA組和HSA組在劑量為120μg/mL以下不研究確定以120μg/mL作為TDI-HSA和HSA的最高處理....

圖2不同濃度TDI-HSA、HSA對16HBE細(xì)胞FITC表達(dá)的影響

濟(jì)南大學(xué)碩士學(xué)位論文1.3.3TDI-HSA和HSA對16HBE細(xì)胞ROS表達(dá)的影響16HBE細(xì)胞ROS表達(dá)水平在處理組間、染毒劑量的主效應(yīng)上、處理組間與染毒劑量的交互作用上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F值分別為530.74、117.21、119.50，P＜0.01....

圖3不同濃度TDI-HSA、HSA對細(xì)胞IL-4，IL-6表達(dá)的影響

圖3不同濃度TDI-HSA、HSA對細(xì)胞IL-4，IL-6表達(dá)的影響注：與對照組相比，#P<0.05。表2各組16HBE細(xì)胞內(nèi)ROS和細(xì)胞上清液中IL-4、IL-6水平的比較（x±s）樣品數(shù)（個(gè)）ROSIL-4（ng/L）IL-6（ng/L）T....

圖4透射電子顯微鏡下不同劑量TDI-HSA處理16HBE細(xì)胞后自噬表達(dá)情況（×12000）

電子顯微鏡下不同劑量TDI-HSA處理16HBE細(xì)胞后自噬表達(dá)情況（B：40μg/mLTDI-HSA組；C：80μg/mLTDI-HSA組；D：120μg/mLTDI-HSA組自噬溶酶體。HSA處理細(xì)胞后自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)比較，40、80、120μg/mLTD....

本文編號(hào)：3899442