目的:觀察骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)靜脈移植對六價鉻[Cr(Ⅵ)]致大鼠肝臟損傷的修復作用,探討B(tài)MSCs是否通過SIRT1/HIF-1α途徑減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的細胞凋亡修復肝臟損傷的機制。方法:采用全骨髓貼壁的方法分離、純化、培養(yǎng)BMSCs,應用流式細胞儀檢測其細胞周期和表面標志CD45和CD90,應用成脂誘導液誘導其向脂肪細胞分化,油紅O染色鑒定。24只Wistar大鼠被隨機分成對照組、模型組和細胞治療組,每組8只,通過腹腔注射的方式分別給予含0、0.4和0.4 mg/kg.bw Cr⁶⁺的重鉻酸鉀鹽溶液,每周染毒5次,連續(xù)染毒30天。染毒結束后,細胞治療組大鼠在24h和48 h經(jīng)球后靜脈移植氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)標記的BMSCs,每次0.1 mL細胞懸液(5×10⁶個細胞),對照組和模型組給予同體積的磷酸緩沖鹽溶液。觀察大鼠飲食飲水狀況和精神狀態(tài)。2周后殺死大鼠,檢測血清ALT(Alanine aminotransferase)和AST(Aspartate...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞
第1章 緒論
    1.1 Cr(Ⅵ)及其污染狀況
    1.2 人群Cr(Ⅵ)暴露途徑
    1.3 Cr(Ⅵ)對機體的損害
        1.3.1 Cr(Ⅵ)對肝臟的損害
        1.3.2 Cr(Ⅵ)對腎臟的損害
        1.3.3 Cr(Ⅵ)對睪丸的損害
        1.3.4 Cr(Ⅵ)對機體的其他損害
    1.4 Cr(Ⅵ)致肝臟損傷的機制
        1.4.1 氧化應激
        1.4.2 炎癥反應
        1.4.3 DNA損傷和致突變性
        1.4.4 線粒體損傷
        1.4.5 肝細胞Ca2+超載
        1.4.6 細胞周期阻滯
        1.4.7 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的凋亡
    1.5 Cr(Ⅵ)致肝臟損傷的治療現(xiàn)狀
    1.6 干細胞移植治療概述
        1.6.1 干細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞
        1.6.2 BMSCs移植治療肝臟疾病的現(xiàn)狀
        1.6.3 BMSCs移植治療肝臟疾病的機制
第2章 材料與方法
    2.1 主要試劑與儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 實驗動物
    2.2 方法
        2.2.1 BMSCs的分離、培養(yǎng)和擴增
        2.2.2 BMSCs的細胞周期檢測
        2.2.3 BMSCs的鑒定
        2.2.4 Cr(Ⅵ)致大鼠肝臟損傷模型的建立
        2.2.5 CM-Dil標記BMSCs并移植
        2.2.6 BMSCs對 Cr(Ⅵ)致大鼠肝臟損傷修復作用的觀察
        2.2.7 BMSCs對 Cr(Ⅵ)致大鼠肝臟損傷修復機制的探討
        2.2.8 統(tǒng)計學分析
第3章 結果
    3.1 Cr(Ⅵ)致大鼠肝臟損傷模型病理結果
    3.2 BMSCs的分離培養(yǎng)、擴增、鑒定和標記
        3.2.1 BMSCs的分離培養(yǎng)
        3.2.2 BMSCs的鑒定
        3.2.3 CM-Dil標記BMSCs
    3.3 BMSCs對 Cr(Ⅵ)致大鼠肝臟損傷的修復作用
        3.3.1 大鼠一般狀態(tài)觀察
        3.3.2 大鼠肝臟中鉻含量
        3.3.3 大鼠血清中ALT和 AST檢測
        3.3.4 大鼠肝臟大體觀察和病理組織學變化
    3.4 BMSCs對 Cr(Ⅵ)致大鼠肝臟損傷的修復機制
        3.4.1 TUNEL法檢測肝細胞凋亡
        3.4.2 大鼠肝組織MDA含量和SOD活性
        3.4.3 免疫組織化學法檢測SIRT1和HIF-1α蛋白的表達
        3.4.4 Western blot法檢測SIRT1和HIF-1α蛋白的表達
        3.4.5 免疫組織化學法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的凋亡相關蛋白的表達
        3.4.6 Western blot法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的凋亡相關蛋白的表達
        3.4.7 Western blot法檢測Bcl-2和Bax的表達
        3.4.8 BMSCs在大鼠肝臟的定植
第4章 討論
    4.1 BMSCs的分離培養(yǎng)和鑒定
        4.1.1 BMSCs的分離培養(yǎng)和細胞周期
        4.1.2 BMSCs的表面標志和分化能力鑒定
    4.2 BMSCs對 Cr(Ⅵ)致大鼠肝損傷的修復作用
    4.3 BMSCs對 Cr(Ⅵ)致大鼠肝損傷的修復機制
第5章 結論
參考文獻
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3816383