鎘是一種有毒重金屬,也是一種分布廣泛的環(huán)境污染物。研究發(fā)現(xiàn),環(huán)境鎘暴露水平與骨密度降低有密切聯(lián)系。作為機(jī)體主要的代謝過(guò)程,“骨重建”是維持骨骼正常發(fā)育所必需的,其失衡可能?chē)?yán)重影響骨骼的形態(tài)和功能。破骨細(xì)胞是體內(nèi)唯一具有骨吸收活性的多核巨細(xì)胞,其在骨重建活動(dòng)中發(fā)揮著重要作用,活性或數(shù)量的變化均會(huì)造成骨重建失衡,引發(fā)骨質(zhì)疏松類疾病。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)Rho GTPases在破骨細(xì)胞分化過(guò)程中發(fā)揮重要作用。然而,鎘對(duì)破骨細(xì)胞分化的影響及其過(guò)程中Rho GTPases信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制尚不明確。本文從體內(nèi)和體外研究鎘對(duì)破骨細(xì)胞分化的影響及Rho GTPases信號(hào)通路的調(diào)控,為進(jìn)一步揭示鎘對(duì)骨的毒性機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。1.鎘暴露對(duì)小鼠骨組織破骨細(xì)胞分化的影響將36只5周齡雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為三組,分別飲用濃度為0、5、25mg/L的鎘水,持續(xù)16周,每周統(tǒng)計(jì)飲水和采食量。試驗(yàn)結(jié)束后,采集全血、血清和尿液,剖殺小鼠采集骨組織。利用原子吸收光譜法測(cè)定全血、尿液、前肢骨的鎘含量,生化儀測(cè)定血清堿性磷酸酶(ALP)活性和血清鈣、磷(Ca、P)含量及尿液Ca、P含量,原子吸收分光光度法測(cè)定前肢骨中Ca...

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 鎘的毒性機(jī)制研究進(jìn)展
        1. 鎘對(duì)機(jī)體的毒理機(jī)制
        2. 鎘對(duì)骨的損傷機(jī)制
    第二章 破骨細(xì)胞分化及其功能研究進(jìn)展
        1. 破骨細(xì)胞分化
        2. 破骨細(xì)胞骨吸收機(jī)制
        3. 鎘調(diào)控破骨細(xì)胞分化的機(jī)制
    第三章 Rho GTPases研究進(jìn)展
        1. Rho GTPases研究進(jìn)展
        2. Rho GTPases信號(hào)通路在破骨細(xì)胞分化分化過(guò)程中的調(diào)控作用
本研究的目的與意義
第二部分 試驗(yàn)研究
    第一章 鎘暴露對(duì)小鼠骨組織破骨細(xì)胞分化的影響
        1 材料
            1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 試驗(yàn)溶液配制
            2.2 試驗(yàn)分組與處理
            2.3 小鼠全血、尿液和前肢骨元素含量測(cè)定
            2.4 小鼠后肢骨病理組織學(xué)變化
            2.5 免疫組化觀察小鼠后肢骨OPG、RANKL蛋白的分布和表達(dá)
            2.6 ELISA法檢測(cè)小鼠血清TRACP-5b及E2含量
            2.7 qRT-PCR檢測(cè)小鼠骨髓細(xì)胞中相關(guān)蛋白mRNA的表達(dá)水平
            2.8 免疫印跡(Western-blot)法檢測(cè)小鼠骨髓細(xì)胞中相關(guān)蛋白含量
            2.9 數(shù)據(jù)分析
        3 結(jié)果
            3.1 鎘對(duì)小鼠體重、采食量的影響
            3.2 小鼠血液、尿液及骨組織鎘含量變化
            3.3 鎘對(duì)小鼠骨相關(guān)生化指標(biāo)的影響
            3.4 鎘對(duì)小鼠骨骼Ca、P及微量元素含量的影響
            3.5 鎘對(duì)小鼠骨骼組織學(xué)的影響
            3.6 鎘對(duì)血清OC分化相關(guān)指標(biāo)的影響
            3.7 鎘對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞中OC特異性蛋白mRNA表達(dá)的影響
            3.8 錫對(duì)骨髓細(xì)胞OC特異性蛋白及OPG、RANKL蛋白表達(dá)的影響
            3.9 鎘對(duì)骨硬質(zhì)中RANKL、OPG蛋白的分布及表達(dá)量的影響
            3.10 鎘對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞中Rho GTPases關(guān)鍵蛋白及其mRNA表達(dá)的影響
        4 討論
    第二章 Rho GTPases信號(hào)通路在鎘影響破骨細(xì)胞分化中的作用研究
        1 材料
            1.1 試驗(yàn)細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 試驗(yàn)溶液配制
            2.2 RAW264.7培養(yǎng)及破骨細(xì)胞的誘導(dǎo)分化
            2.3 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力
            2.4 破骨細(xì)胞TRAP染色
            2.5 免疫熒光法觀察細(xì)胞骨架
            2.6 Transwell法檢測(cè)破骨細(xì)胞前體細(xì)胞遷移能力
            2.7 qRT-PCR測(cè)定相關(guān)蛋白mRNA水平的表達(dá)
            2.8 Western blot測(cè)定相關(guān)蛋白的表達(dá)
            2.9 數(shù)據(jù)分析
        3 結(jié)果
            3.1 鎘對(duì)破骨細(xì)胞分化的影響
            3.2 鎘對(duì)破骨細(xì)胞前體細(xì)胞Rho GTPases信號(hào)通路的影響
            3.3 鎘對(duì)破骨細(xì)胞Rho GTPases信號(hào)通路的影響
        4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3768625