本文關(guān)鍵詞：無(wú)機(jī)砷對(duì)大鼠HSC纖維化改變及DNMTs表達(dá)的實(shí)驗(yàn)觀察，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究不同劑量無(wú)機(jī)砷刺激大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC)后其纖維化情況,觀察在此過(guò)程中DNMTs的變化,為進(jìn)一步闡述無(wú)機(jī)砷致肝損傷的作用機(jī)制提供依據(jù)。方法:1.采用MTT還原法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞活力;確定LC50和染毒濃度即亞砷酸鈉(As3+)低、中、高劑量組和砷酸鈉(As5+)低、中、高劑量組。2.流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)不同劑量和時(shí)間點(diǎn)的大鼠HSC-T6的凋亡情況。3.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA)檢測(cè)無(wú)機(jī)砷干預(yù)大鼠HSC-T6后的Ⅰ型膠原(COL-1)、Ⅲ型膠原(COL-3)和α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的含量。4.通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量(Real-Time Quantitative PCR)檢測(cè)無(wú)機(jī)砷干預(yù)大鼠HSC-T6后TGF-β1、DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b和DNMT3l的mRNA的表達(dá)水平。5.蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗(yàn))即Western Blot檢測(cè)無(wú)機(jī)砷干預(yù)大鼠HSC-T6后TGF-β1和DNMT3a在細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.無(wú)機(jī)砷染毒HSC-T6細(xì)胞48h時(shí),測(cè)得As3+的LC50為60.00μmol/L,As5+的LC50為93.00μmol/L,即亞砷酸鈉組的低、中、高劑量依次是5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L。砷酸鈉組的低、中、高劑量依次是20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L。對(duì)照組為0μmol/L。細(xì)胞的增殖活力隨劑量時(shí)間升高而降低。2.在24h時(shí),除五價(jià)砷低劑量組外其它染毒組的凋亡率都高于對(duì)照組(P㩳0.05);48h和72h時(shí)隨著染砷濃度的增加,凋亡率逐漸升高(P㩳0.05)。濃度一定時(shí),所有染砷組隨著染砷時(shí)間的增加凋亡率升高(P㩳0.05)。3.各染砷組的COL-1、COL-3、α-SMA的含量隨染砷時(shí)間和染砷劑量的增加而升高(P㩳0.05)。4.與對(duì)照組相比TGF-β1的mRNA表達(dá)水平隨染砷劑量的增加而上調(diào)(P㩳0.05);相同濃度隨著染砷時(shí)間的延長(zhǎng),TGF-β1的mRNA表達(dá)水平也在不斷的增加(P㩳0.05)。5.在同一時(shí)間下,DNMT1的mRNA表達(dá)量隨染砷濃度的升高而上調(diào)(P㩳0.05);同一濃度下,DNMT1mRNA的表達(dá)量隨染砷時(shí)間遞增而下調(diào)(P㩳0.05)。6.同一時(shí)間下,隨三價(jià)砷染毒劑量的升高DNMT2mRNA的表達(dá)水平呈現(xiàn)為上調(diào)(P㩳0.05),而五價(jià)砷染毒劑量的升高DNMT2mRNA的表達(dá)水平呈現(xiàn)為下調(diào)(P㩳0.05)。同一濃度下,在48h時(shí)三價(jià)中、高劑量組與五價(jià)低、高劑量組DNMT2mRNA的表達(dá)水平為上調(diào)(P㩳0.05)。7.DNMT3a的mRNA的表達(dá)量隨染砷劑量的升高在降低(P㩳0.05),但仍是上調(diào);同一劑量組下,隨染毒時(shí)間的延長(zhǎng)DNMT3a的mRNA表達(dá)水平為上調(diào)(P㩳0.05)。8.同一時(shí)間下,24h時(shí)三價(jià)砷低劑量組DNMT3b的mRNA是表達(dá)上調(diào)(P㩳0.05),其它組都是表達(dá)下調(diào)(P㩳0.05);48h時(shí)DNMT3b的mRNA在三價(jià)砷中劑量組表達(dá)下調(diào),但在三價(jià)砷高劑量組及五價(jià)砷低、高劑量組表達(dá)上調(diào)(P㩳0.05)。濃度一定的情況下,48h、72h時(shí)DNMT3b的mRNA的表達(dá)在三價(jià)砷中劑量與五價(jià)砷中劑量為下調(diào)(P㩳0.05),其余為上調(diào)(P㩳0.05)。9.24h時(shí)三價(jià)砷高劑量組,五價(jià)砷中、高劑量組DNMT3l的mRNA表達(dá)為上調(diào)(P㩳0.05),48h時(shí)三價(jià)砷中、高劑量組DNMT3l的mRNA表達(dá)為上調(diào)(P㩳0.05)。72h時(shí)三價(jià)砷中劑量組顯示為上調(diào)(P㩳0.05)。同一濃度下,在48h、72h時(shí)的所有染砷組的DNMT3l的mRNA的表達(dá)水平除三價(jià)中劑量是上調(diào),其它組是下調(diào)(P㩳0.05)。10.對(duì)無(wú)機(jī)砷誘導(dǎo)HSC-T6細(xì)胞72h時(shí)的各基因做相關(guān)分析,TGF-β1mRNA的表達(dá)與DNMT2mRNA的表達(dá)和DNMT3amRNA的表達(dá)呈高度正相關(guān)(P㩳0.01)。11.Western Blot檢測(cè)顯示TGF-β1和DNMT3a在細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá)隨時(shí)間和濃度的增加而上升。且不同組間和不同時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05)。結(jié)論:無(wú)機(jī)砷刺激大鼠HSC-T6后,會(huì)引起細(xì)胞的凋亡率升高,增殖活力表現(xiàn)為低濃度促進(jìn),高濃度抑制;肝纖維化相關(guān)膠原COL-1、COL-3和α-SMA的含量有明顯升高,TGF-β1 mRNA和蛋白的表達(dá)均升高,提示無(wú)機(jī)砷刺激HSC-T6后可引起纖維化。纖維化時(shí)DNMT1、DNMT3a表現(xiàn)為上調(diào),DNMT2表現(xiàn)為下調(diào),DNMT3l除三價(jià)砷中劑量為上調(diào)外,其它組都是下調(diào),DNMT3b變化趨勢(shì)不明顯,肝纖維化機(jī)制需做進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：無(wú)機(jī)砷 肝纖維化 肝星狀細(xì)胞 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-24
• 1. 材料16-17
• 2. 方法17-23
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-24
• 結(jié)果24-44
• 討論44-50
• 小結(jié)50-51
• 致謝51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 綜述57-66
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文66-67
• 導(dǎo)師評(píng)閱表67

  本文關(guān)鍵詞：無(wú)機(jī)砷對(duì)大鼠HSC纖維化改變及DNMTs表達(dá)的實(shí)驗(yàn)觀察，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：372868