目的:壬基酚（nonylphenol,NP）是典型的持久性有機(jī)污染物（POPs）,對環(huán)境污染嚴(yán)重。中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）在發(fā)育期對POPs非常敏感。越來越多的證據(jù)表明,發(fā)育期NP暴露會損害CNS。軸突是CNS的基本和必要結(jié)構(gòu),而發(fā)育期NP暴露會對軸突的影響亟待開展。因此,我們建立了發(fā)育期NP暴露模型,研究NP對子代海馬軸突發(fā)育的影響;將NP直接作用于體外培養(yǎng)的神經(jīng)元,觀察其對軸突發(fā)育的損害。在上述研究基礎(chǔ)上,我們深入探討了Wnt-Dvl-GSK-3β信號通路的變化與NP暴露引起軸突損傷之間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)方法:1.將妊娠Wistar大鼠隨機(jī)分為對照組和NP處理組。從妊娠第0天（GD0）至子代出生后第21天（PN21）,NP染毒組通過灌胃給予不同劑量的NP（10,50,100 mg/kg/day）,對照組每天給予玉米油灌胃。PN21和PN80時,對子代海馬進(jìn)行Bielschowsky染色和免疫熒光染色實(shí)驗(yàn),觀察軸突形態(tài)改變;進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測軸突發(fā)育相關(guān)蛋白CRMP-2及其上游信號通路Wnt-DvlGSK-3β相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。2.取新生Wistar大鼠皮質(zhì)提取神經(jīng)元進(jìn)行原代培養(yǎng)。用終濃... 

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 發(fā)育期NP暴露模型的建立
    2.3 Bielschowsky染色
    2.4免疫熒光實(shí)驗(yàn)
    2.5 組織免疫印跡試驗(yàn)(Western blot)分析
    2.6 神經(jīng)元原代培養(yǎng)
        2.6.1 原代大鼠神經(jīng)元的培養(yǎng)
        2.6.2 原代大鼠神經(jīng)元細(xì)胞NP及拮抗劑暴露模型的建立
    2.7原代大鼠神經(jīng)元細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)
    2.8 原代大鼠神經(jīng)元細(xì)胞免疫印跡試驗(yàn)(Western blot)分析
    2.9 原代大鼠神經(jīng)元細(xì)胞FM1-43 熒光染料攝取與釋放實(shí)驗(yàn)
    2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 發(fā)育期NP暴露對仔鼠海馬神經(jīng)元軸突發(fā)育的影響
    3.2 發(fā)育期NP暴露改變仔鼠海馬CRMP-2和p-CRMP-2 蛋白的表達(dá)水平
    3.3 發(fā)育期NP暴露激活仔鼠海馬Wnt-Dvl-GSK-3β信號通路
        3.3.1 發(fā)育期NP暴露激活仔鼠海馬的GSK-3β
        3.3.2 發(fā)育期NP暴露降低仔鼠海馬的Dvl蛋白表達(dá)
        3.3.3 發(fā)育期NP暴露降低仔鼠海馬的Wnt蛋白表達(dá)
    3.4 NP暴露導(dǎo)致原代培養(yǎng)神經(jīng)元軸突損傷
        3.4.1 NP暴露導(dǎo)致原代培養(yǎng)神經(jīng)元軸突形態(tài)損傷
        3.4.2 NP暴露導(dǎo)致原代培養(yǎng)神經(jīng)元軸突功能損傷
    3.5 NP暴露改變原代培養(yǎng)神經(jīng)元CRMP-2和p-CRMP-2 蛋白的表達(dá)水平
    3.6 NP暴露激活原代培養(yǎng)神經(jīng)元中Wnt-Dvl-GSK-3β信號通路
        3.6.1 NP暴露激活原代培養(yǎng)神經(jīng)元的GSK-3β蛋白
        3.6.2 NP暴露降低原代培養(yǎng)神經(jīng)元的Dvl蛋白表達(dá)
        3.6.3 NP暴露降低原代培養(yǎng)神經(jīng)元的Wnt蛋白表達(dá)
    3.7 SB-216763 減弱了NP所致的原代培養(yǎng)神經(jīng)元軸突損傷
        3.7.1 SB-216763 減輕了NP所致的原代培養(yǎng)神經(jīng)元軸突長度減少
        3.7.2 SB-216763 減輕了NP所致的原代培養(yǎng)神經(jīng)元軸突功能損傷
        3.7.3 SB-216763 恢復(fù)了NP所致的原代培養(yǎng)神經(jīng)元CRMP-2和p-CRMP-2的表達(dá)變化
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述 壬基酚的神經(jīng)毒性及機(jī)制的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3719895