發(fā)布時間：2022-12-17 12:02

　　目的:壬基酚（nonylphenol,NP）是典型的持久性有機污染物（POPs）,對環(huán)境污染嚴重。中樞神經系統(tǒng)（CNS）在發(fā)育期對POPs非常敏感。越來越多的證據表明,發(fā)育期NP暴露會損害CNS。軸突是CNS的基本和必要結構,而發(fā)育期NP暴露會對軸突的影響亟待開展。因此,我們建立了發(fā)育期NP暴露模型,研究NP對子代海馬軸突發(fā)育的影響;將NP直接作用于體外培養(yǎng)的神經元,觀察其對軸突發(fā)育的損害。在上述研究基礎上,我們深入探討了Wnt-Dvl-GSK-3β信號通路的變化與NP暴露引起軸突損傷之間的關系。實驗方法:1.將妊娠Wistar大鼠隨機分為對照組和NP處理組。從妊娠第0天（GD0）至子代出生后第21天（PN21）,NP染毒組通過灌胃給予不同劑量的NP（10,50,100 mg/kg/day）,對照組每天給予玉米油灌胃。PN21和PN80時,對子代海馬進行Bielschowsky染色和免疫熒光染色實驗,觀察軸突形態(tài)改變;進行免疫印跡實驗檢測軸突發(fā)育相關蛋白CRMP-2及其上游信號通路Wnt-DvlGSK-3β相關蛋白的表達變化。2.取新生Wistar大鼠皮質提取神經元進行原代培養(yǎng)。用終濃... 

【文章頁數】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 發(fā)育期NP暴露模型的建立
    2.3 Bielschowsky染色
    2.4免疫熒光實驗
    2.5 組織免疫印跡試驗(Western blot)分析
    2.6 神經元原代培養(yǎng)
        2.6.1 原代大鼠神經元的培養(yǎng)
        2.6.2 原代大鼠神經元細胞NP及拮抗劑暴露模型的建立
    2.7原代大鼠神經元細胞免疫熒光實驗
    2.8 原代大鼠神經元細胞免疫印跡試驗(Western blot)分析
    2.9 原代大鼠神經元細胞FM1-43 熒光染料攝取與釋放實驗
    2.10 統(tǒng)計學分析
3 結果
    3.1 發(fā)育期NP暴露對仔鼠海馬神經元軸突發(fā)育的影響
    3.2 發(fā)育期NP暴露改變仔鼠海馬CRMP-2和p-CRMP-2 蛋白的表達水平
    3.3 發(fā)育期NP暴露激活仔鼠海馬Wnt-Dvl-GSK-3β信號通路
        3.3.1 發(fā)育期NP暴露激活仔鼠海馬的GSK-3β
        3.3.2 發(fā)育期NP暴露降低仔鼠海馬的Dvl蛋白表達
        3.3.3 發(fā)育期NP暴露降低仔鼠海馬的Wnt蛋白表達
    3.4 NP暴露導致原代培養(yǎng)神經元軸突損傷
        3.4.1 NP暴露導致原代培養(yǎng)神經元軸突形態(tài)損傷
        3.4.2 NP暴露導致原代培養(yǎng)神經元軸突功能損傷
    3.5 NP暴露改變原代培養(yǎng)神經元CRMP-2和p-CRMP-2 蛋白的表達水平
    3.6 NP暴露激活原代培養(yǎng)神經元中Wnt-Dvl-GSK-3β信號通路
        3.6.1 NP暴露激活原代培養(yǎng)神經元的GSK-3β蛋白
        3.6.2 NP暴露降低原代培養(yǎng)神經元的Dvl蛋白表達
        3.6.3 NP暴露降低原代培養(yǎng)神經元的Wnt蛋白表達
    3.7 SB-216763 減弱了NP所致的原代培養(yǎng)神經元軸突損傷
        3.7.1 SB-216763 減輕了NP所致的原代培養(yǎng)神經元軸突長度減少
        3.7.2 SB-216763 減輕了NP所致的原代培養(yǎng)神經元軸突功能損傷
        3.7.3 SB-216763 恢復了NP所致的原代培養(yǎng)神經元CRMP-2和p-CRMP-2的表達變化
4 討論
5 結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述 壬基酚的神經毒性及機制的研究進展
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3719895