發(fā)布時(shí)間：2017-05-16 18:21

  本文關(guān)鍵詞：甲醛對(duì)HepG2細(xì)胞脂肪代謝的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)甲醛可以致肝組織損傷和氧化損傷作用，流行病學(xué)研究也發(fā)現(xiàn)甲醛有致癌性。本課題組以HepG2（人肝癌細(xì)胞株）為模型，證實(shí)了甲醛可致肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量增加，并通過檢測甲醛染毒后HepG2細(xì)胞內(nèi)與脂代謝相關(guān)蛋白的含量，尋找引起肝臟甘油三酯的積累和脂肪變化的可能機(jī)制，從而為預(yù)防甲醛的濫用保護(hù)人類健康提供理論依據(jù)。方法 人肝癌細(xì)胞株（HepG2）在含10%小牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)板，分別以0.02、0.1、0.5、2.5、12.5mmol/L濃度的甲醛（Formaldehyde，F(xiàn)A）染毒液處理HepG2人肝癌細(xì)胞株24和48h，用CCK-8法進(jìn)行細(xì)胞活性檢測；采用GPO-POD酶法測定細(xì)胞內(nèi)TG（甘油三酯）水平；用Hoechst33258進(jìn)行核染色以觀察細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化；檢測蛋白時(shí)以0.004、0.02、0.1mmol/L濃度的甲醛處理人肝癌細(xì)胞HepG224和48h，采用Western blot法檢測肉堿酯酰轉(zhuǎn)移酶1（Carnitine palmitoyl transferase1，CPT1）、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1（cSterol regulatory element-binding protern-1c，SREBP-1c）、SAR1A蛋白（Secretion-associated and Ras-related protein1A，SAR1A）、腺苷酸核糖基化因子1（ADP-ribosylation factor1，Arf1）、包被蛋白Ⅰ（Coat protein comlex Ⅰ，COPⅠ）、甘油三酯水解酶（Triacylglycerol hydrolase，TGH）和微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Microsomaltriglyceride transfer protein，MTP）的蛋白表達(dá)水平；采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中極低密度脂蛋白（VLDL）水平、載脂蛋白E（ApoE）和載脂蛋白B100（ApoB100）的分泌情況。結(jié)果 1、甲醛對(duì)HepG2細(xì)胞活性的影響：染毒24h后，0.5～12.5mmol/L FA作用組HepG2細(xì)胞D（470）值均低于陰性對(duì)照組（P0.05），且隨著染毒濃度的增加，D（470）值逐漸降低，說明隨著FA濃度的增加，對(duì)HepG2細(xì)胞活性的抑制作用逐漸增強(qiáng)。但0.02mmol/LFA劑量組肝細(xì)胞存活率明顯高于陰性對(duì)照組，說明該劑量作用下FA對(duì)肝細(xì)胞有促進(jìn)增殖作用。染毒48h后，0.1～12.5mmol/L FA作用組肝細(xì)胞活性均明顯降低，進(jìn)一步提示FA對(duì)肝細(xì)胞的活性抑制作用。 2、Hoechst33258染色結(jié)果：24h和48h處理后，0.5、2.5、12.5mmol/L FA組熒光染色后出現(xiàn)大量的核呈固縮狀態(tài)或顆粒狀的死亡細(xì)胞，10mmol/L CP陽性對(duì)照組同樣出現(xiàn)致密濃染的細(xì)胞核，并且細(xì)胞數(shù)量明顯減少，尤其是2.5～12.5mmol/L組和陽性對(duì)照組。陰性對(duì)照組和低劑量組細(xì)胞核熒光染色較淺，細(xì)胞核未固縮。 3、甲醛對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量的影響：經(jīng)染毒24h后0.1mmol/L FA組與陰性對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。48h后0.02和0.1mmol/L FA組與陰性對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）但是48h TG含量低于24h組，CP組TG含量48h較24h含量升高。 4、甲醛染毒對(duì)HepG2細(xì)胞CPT1和SREBP-1c蛋白表達(dá)影響：在FA染毒24h后，HepG2細(xì)胞CPT1表達(dá)無明顯變化，48h后表達(dá)受到明顯抑制；SREBP-1c表達(dá)水平在染毒24h和48h后均高于陰性對(duì)照組，提示FA接觸初期僅促進(jìn)HepG2細(xì)胞內(nèi)脂肪合成，隨著染毒時(shí)間的延長，對(duì)脂肪酸氧化的抑制也逐漸顯現(xiàn)。 5、甲醛染毒對(duì)肝細(xì)胞TGH和MTP蛋白表達(dá)的影響：24h處理后0.1mmol/L甲醛和油酸組的TGH蛋白表達(dá)量明顯增加，48h各處理組TGH表達(dá)量均顯著低于陰性對(duì)照組。染毒48h后0.1mmol/L甲醛組MTP蛋白表達(dá)水平明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 6、甲醛染毒對(duì)肝細(xì)胞Arf1和COPⅠ、SAR1A蛋白表達(dá)的影響：甲醛處理24h后可引起肝細(xì)胞內(nèi)Arf1和COPⅠ蛋白表達(dá)水平明顯增加，處理48h后，Arf1蛋白表達(dá)水平趨于正常，而COPⅠ蛋白表達(dá)水平仍高于陰性對(duì)照組。這提示甲醛接觸早期，肝細(xì)胞可通過增加Arf1和COPⅠ蛋白表達(dá)，促進(jìn)VLDL的分泌而減少TG在細(xì)胞內(nèi)的積累。隨著染毒時(shí)間的延長，這種保護(hù)作用逐漸減弱。SAR1A水平未發(fā)現(xiàn)顯著變化。 7、甲醛染毒對(duì)HepG2細(xì)胞上清中VLDL、ApoE和ApoB100含量的影響：染毒24h、48h后，各甲醛處理組細(xì)胞上清中的VLDL和ApoE含量無明顯變化，與陰性對(duì)照組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。24h處理后，，0.1mmol/L甲醛組和油酸組ApoB100含量顯著低于陰性對(duì)照組，48h后，0.02、0.1mmol/L甲醛組和油酸組ApoB100含量顯著低于陰性對(duì)照組（P0.05），可能與細(xì)胞對(duì)ApoB100的再攝取有關(guān)。結(jié)論 1高濃度甲醛可引起肝細(xì)胞活性明顯降低，甚至出現(xiàn)死亡。 2低濃度甲醛能夠干擾肝細(xì)胞脂肪代謝，引起肝細(xì)胞內(nèi)TG含量增加，其原因可能與甲醛抑制肝細(xì)胞的脂肪酸氧化，促進(jìn)肝細(xì)胞TG合成有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：甲醛 HepG2細(xì)胞 甘油三酯 肉堿酯酰轉(zhuǎn)移酶1 固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c 腺苷酸核糖基化因子1 包被蛋白Ⅰ 甘油三酯水解酶 微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移酶 極低密度脂蛋白E 載脂蛋白B100
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 中英文縮寫詞對(duì)照表11-12
• 前言12-14
• 第一章 材料與方法14-22
• 1.1 材料14-15
• 1.2 方法15-22
• 1.3 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22
• 第二章 結(jié)果22-34
• 2.1 甲醛對(duì) HepG2 細(xì)胞活性的影響22-23
• 2.2 Hoechst33258 細(xì)胞核熒光染色結(jié)果23-25
• 2.3 甲醛對(duì) HepG2 細(xì)胞內(nèi)甘油三酯（TG）含量的影響25-26
• 2.4 甲醛染毒對(duì) HepG2 細(xì)胞 CPT1 和 SREBP-1c 蛋白表達(dá)影響26-27
• 2.5 甲醛染毒對(duì)肝細(xì)胞 TGH 和 MTP 蛋白表達(dá)的影響27-29
• 2.6 甲醛染毒對(duì)肝細(xì)胞 Arf1 、COPⅠ和 SAR1A 蛋白表達(dá)的影響29-32
• 2.7 甲醛染毒對(duì) HepG2 細(xì)胞上清中 VLDL、ApoE 和 ApoB100 含量的影響32-34
• 第三章 討論34-40
• 3.1 甲醛對(duì) HepG2 細(xì)胞活性的影響34-35
• 3.2 Hoechst33258 染色結(jié)果35
• 3.3 甲醛對(duì) HepG2 細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量的影響35
• 3.4 甲醛染毒對(duì) HepG2 細(xì)胞 CPT1 和 SREBP-1c 蛋白表達(dá)影響35-36
• 3.5 甲醛染毒對(duì)肝細(xì)胞 TGH 和 MTP 蛋白表達(dá)的影響36-37
• 3.6 甲醛染毒對(duì)肝細(xì)胞 Arf1 、COPⅠ和 SAR1A 蛋白表達(dá)的影響37-38
• 3.7 甲醛染毒對(duì) HepG2 細(xì)胞上清中 VLDL、ApoE 和 ApoB100 含量的影響38-40
• 第四章 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 附錄 綜述46-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 個(gè)人簡歷57-58
• 致謝58

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