目的:鋁（aluminum,Al）是一種重要的神經(jīng)毒物,腦是鋁主要的蓄積部位和重要的靶器官,慢性鋁暴露與神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生密切相關(guān)。之前的研究表明,鋁誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激通常發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）,乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene1,BRCA1）可能在其中發(fā)揮重要作用。本研究通過(guò)檢測(cè)鋁暴露對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷,線粒體損傷及BRCA1、Nrf2表達(dá)的影響,來(lái)探討鋁暴露導(dǎo)致神經(jīng)元發(fā)生神經(jīng)退行性改變的可能機(jī)制。研究方法:NSE免疫熒光法對(duì)SH-SH5Y細(xì)胞進(jìn)行神經(jīng)元特性鑒定。采用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞活力,確定鋁和抗氧化劑槲皮素的暴露劑量及暴露時(shí)間。光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。試劑盒法測(cè)定細(xì)胞MDA、GSH水平。ELISA法測(cè)定細(xì)胞ATP水平。流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡/壞死率,線粒體膜電位。RT-PCR檢測(cè)Brca1和Nrf2及其下游Gclc、Ho-1、Nqo1 mRNA水平。Western印跡分析檢測(cè)BRCA1、NRF2及其下游NQO1、GCLC、HO-1的蛋白表達(dá)水平。免疫共沉淀法測(cè)定BRCA1與NRF2蛋白間相互作用及Nrf2泛素化... 

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
1 前言
2 材料與方法
    2.1 主要試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 主要溶液配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)條件的無(wú)毒化處理
    2.4 SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)
    2.5 SH-SY5Y神經(jīng)元特性鑒定
    2.6 鋁暴露劑量及干預(yù)劑劑量的選擇
    2.7 鋁暴露對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響
    2.8 鋁暴露對(duì)細(xì)胞氧化指標(biāo)的測(cè)定
    2.9 鋁暴露對(duì)細(xì)胞凋亡/壞死率的測(cè)定
    2.10 鋁暴露對(duì)細(xì)胞ATP水平的測(cè)定
    2.11 鋁暴露對(duì)細(xì)胞線粒體膜電位的測(cè)定
    2.12 Brca1、Nrf2、Gclc、Ho-1、Nqo1的m RNA水平測(cè)定
    2.13 BRCA1、NRF2、GCLC、HO-1、NQO1 的蛋白水平測(cè)定
    2.14 FSK對(duì) BRCA1與Nrf2 表達(dá)的影響
    2.15 BRCA1與Nrf2 免疫熒光共定位
    2.16 鋁暴露對(duì)BRCA1與Nrf2 相互作用的測(cè)定
    2.17 鋁暴露對(duì)Nrf2泛素化水平的測(cè)定
    2.18 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 SH-SY5Y神經(jīng)元特性鑒定
    3.2 鋁暴露劑量的選擇
    3.3 抗氧化劑劑量的確定
        3.3.1 不同濃度QUE暴露對(duì)對(duì)照組細(xì)胞活力的影響
        3.3.2 不同濃度QUE暴露對(duì)高劑量組細(xì)胞活力的影響
    3.4 鋁暴露及QUE干預(yù)對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響
    3.5 鋁暴露及QUE干預(yù)對(duì)細(xì)胞GSH水平的影響
    3.6 鋁暴露及QUE干預(yù)對(duì)細(xì)胞MDA水平的影響
    3.7 鋁暴露及QUE干預(yù)對(duì)細(xì)胞凋亡/壞死率的影響
    3.8 鋁暴露及QUE干預(yù)對(duì)細(xì)胞ATP水平的影響
    3.9 鋁暴露及QUE干預(yù)對(duì)細(xì)胞線粒體膜電位的影響
    3.10 鋁暴露及QUE干預(yù)對(duì)細(xì)胞BRCA1 m RNA和蛋白水平的影響
    3.11 鋁暴露及QUE干預(yù)對(duì)細(xì)胞Nrf2、GCLC、HO-1、NQO1 m RNA和蛋白水平的影響
    3.12 FSK干預(yù)對(duì)鋁暴露神經(jīng)細(xì)胞BRCA1及Nrf2 水平的影響
    3.13 鋁暴露神經(jīng)細(xì)胞BRCA1與Nrf2 免疫熒光共定位
    3.14 鋁暴露對(duì)BRCA1與Nrf2 相互作用的影響
    3.15 鋁暴露對(duì)Nrf2泛素化水平的影響
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
實(shí)踐報(bào)告
在學(xué)期間科研成績(jī)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3700823