目的:鋁（aluminum,Al）是一種重要的神經(jīng)毒物,腦是鋁主要的蓄積部位和重要的靶器官,慢性鋁暴露與神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生密切相關。之前的研究表明,鋁誘導的氧化應激通常發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）,乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene1,BRCA1）可能在其中發(fā)揮重要作用。本研究通過檢測鋁暴露對SH-SY5Y細胞氧化損傷,線粒體損傷及BRCA1、Nrf2表達的影響,來探討鋁暴露導致神經(jīng)元發(fā)生神經(jīng)退行性改變的可能機制。研究方法:NSE免疫熒光法對SH-SH5Y細胞進行神經(jīng)元特性鑒定。采用CCK-8法測定細胞活力,確定鋁和抗氧化劑槲皮素的暴露劑量及暴露時間。光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)。試劑盒法測定細胞MDA、GSH水平。ELISA法測定細胞ATP水平。流式細胞術測定細胞凋亡/壞死率,線粒體膜電位。RT-PCR檢測Brca1和Nrf2及其下游Gclc、Ho-1、Nqo1 mRNA水平。Western印跡分析檢測BRCA1、NRF2及其下游NQO1、GCLC、HO-1的蛋白表達水平。免疫共沉淀法測定BRCA1與NRF2蛋白間相互作用及Nrf2泛素化... 

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 主要試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 主要溶液配制
    2.3 實驗條件的無毒化處理
    2.4 SH-SY5Y細胞培養(yǎng)
    2.5 SH-SY5Y神經(jīng)元特性鑒定
    2.6 鋁暴露劑量及干預劑劑量的選擇
    2.7 鋁暴露對SH-SY5Y細胞形態(tài)學的影響
    2.8 鋁暴露對細胞氧化指標的測定
    2.9 鋁暴露對細胞凋亡/壞死率的測定
    2.10 鋁暴露對細胞ATP水平的測定
    2.11 鋁暴露對細胞線粒體膜電位的測定
    2.12 Brca1、Nrf2、Gclc、Ho-1、Nqo1的m RNA水平測定
    2.13 BRCA1、NRF2、GCLC、HO-1、NQO1 的蛋白水平測定
    2.14 FSK對 BRCA1與Nrf2 表達的影響
    2.15 BRCA1與Nrf2 免疫熒光共定位
    2.16 鋁暴露對BRCA1與Nrf2 相互作用的測定
    2.17 鋁暴露對Nrf2泛素化水平的測定
    2.18 統(tǒng)計學分析
3 實驗結果
    3.1 SH-SY5Y神經(jīng)元特性鑒定
    3.2 鋁暴露劑量的選擇
    3.3 抗氧化劑劑量的確定
        3.3.1 不同濃度QUE暴露對對照組細胞活力的影響
        3.3.2 不同濃度QUE暴露對高劑量組細胞活力的影響
    3.4 鋁暴露及QUE干預對SH-SY5Y細胞形態(tài)學的影響
    3.5 鋁暴露及QUE干預對細胞GSH水平的影響
    3.6 鋁暴露及QUE干預對細胞MDA水平的影響
    3.7 鋁暴露及QUE干預對細胞凋亡/壞死率的影響
    3.8 鋁暴露及QUE干預對細胞ATP水平的影響
    3.9 鋁暴露及QUE干預對細胞線粒體膜電位的影響
    3.10 鋁暴露及QUE干預對細胞BRCA1 m RNA和蛋白水平的影響
    3.11 鋁暴露及QUE干預對細胞Nrf2、GCLC、HO-1、NQO1 m RNA和蛋白水平的影響
    3.12 FSK干預對鋁暴露神經(jīng)細胞BRCA1及Nrf2 水平的影響
    3.13 鋁暴露神經(jīng)細胞BRCA1與Nrf2 免疫熒光共定位
    3.14 鋁暴露對BRCA1與Nrf2 相互作用的影響
    3.15 鋁暴露對Nrf2泛素化水平的影響
4 討論
5 結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
實踐報告
在學期間科研成績
致謝
個人簡歷



本文編號：3700823