發(fā)布時(shí)間：2022-07-12 10:32

　　研究背景與目的:鈾是一種嚴(yán)重的環(huán)境污染物,腎臟是鈾富集的主要靶器官,腎功能損傷是鈾暴露的顯著特征,但是鈾誘導(dǎo)腎毒性的分子機(jī)制以及保護(hù)作用還沒有闡述清楚。目前細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是鈾誘導(dǎo)腎毒性的機(jī)制之一,硫化氫（Hydrogen sulfide,H2S）作為一種氣體信號(hào)分子,具有潛在的抗凋亡作用。本研究有兩個(gè)目的:（1）闡明鈾誘導(dǎo)的腎細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制;（2）探討H2S對(duì)鈾誘導(dǎo)腎細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。方法:傳代培養(yǎng)SD大鼠腎近端小管上皮細(xì)胞（NRK-52E）,采用MTT法評(píng)價(jià)細(xì)胞活力,分光光度法檢測LDH含量,Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡,DCFH-DA熒光探針測定ROS含量,Western blots檢測凋亡標(biāo)志蛋白Caspase-3,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白（GRP78、p-PERK、p-IRE1和ATF6）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)凋亡標(biāo)志蛋白（CHOP和Caspase-12）、轉(zhuǎn)錄因子Nrf2、Akt/GSK3β/Fyn通路相關(guān)蛋白（p-Akt、p-GSK3β和Fyn）、以及蛋白酶體系統(tǒng)相關(guān)蛋白（PSMA6和PSMB7）的表達(dá)。采用500μM乙酰雙氧鈾染毒腎細(xì)胞,在四個(gè)時(shí)... 

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫詞索引
第一章 鈾誘導(dǎo)大鼠腎細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制
    1.1 引言
    1.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        1.2.1 主要試劑
        1.2.2 主要儀器
        1.2.3 腎細(xì)胞系
        1.2.4 試劑配制
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 腎細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.2 實(shí)驗(yàn)分組
        1.3.3 細(xì)胞活力測定
        1.3.4 LDH含量檢測
        1.3.5 細(xì)胞凋亡檢測
        1.3.6 ROS含量測定
        1.3.7 蛋白質(zhì)印跡
        1.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.4 結(jié)果
        1.4.1 鈾染毒產(chǎn)生腎細(xì)胞毒性
        1.4.2 鈾染毒引起腎細(xì)胞凋亡
        1.4.3 鈾染毒腎細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        1.4.4 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)鈾誘導(dǎo)的腎細(xì)胞凋亡
        1.4.5 ROS含量減少緩解鈾誘導(dǎo)的凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        1.4.6 鈾染毒擾亂Akt/GSK3β/Fyn通路并使胞核Nrf2含量下降
        1.4.7 Akt磷酸化增加緩解鈾誘導(dǎo)的腎細(xì)胞凋亡
        1.4.8 ROS含量減少激活鈾抑制的Akt磷酸化
    1.5 討論
    1.6 結(jié)論
第二章 H_2S對(duì)鈾誘導(dǎo)的大鼠腎細(xì)胞凋亡的拮抗作用
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器
        2.2.3 試劑配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3.2 相關(guān)實(shí)驗(yàn)
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 H_2S緩解鈾誘導(dǎo)的腎細(xì)胞凋亡
        2.4.2 H_2S抑制鈾誘導(dǎo)的腎細(xì)胞ROS生成
        2.4.3 H_2S抑制鈾誘導(dǎo)的腎細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        2.4.4 H_2S激活鈾抑制的Akt/GSK3β/Fyn通路而提高胞核Nrf2含量
        2.4.5 Nrf2表達(dá)下降逆轉(zhuǎn)H_2S對(duì)鈾抑制的蛋白酶體系統(tǒng)的激活
        2.4.6 抑制蛋白酶體系統(tǒng)可逆轉(zhuǎn)H_2S對(duì)鈾誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的拮抗作用
    2.5 討論
    2.6 結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)及展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
研究生期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及獲獎(jiǎng)情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Nrf2通路損傷介導(dǎo)鈾誘導(dǎo)的大鼠急性腎毒性[J]. 袁嫣,易娟,趙婷婷,鄭濟(jì)芳.  環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué). 2016(09)



本文編號(hào)：3658961