本文關(guān)鍵詞：甲基硝基亞硝基胍致哈薩克族正常食管上皮細(xì)胞表觀遺傳改變的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討甲基硝基亞硝基胍(MNNG)對(duì)哈薩克族正常食管上皮細(xì)胞一般生物學(xué)及表觀遺傳學(xué)指標(biāo)的改變,為哈薩克族食管癌的防治提供理論依據(jù)。方法：1聯(lián)合消化法培養(yǎng)原代哈族食管上皮細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)學(xué)和角蛋白免疫組織化學(xué)法鑒定細(xì)胞。2SV40-T抗原基因轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的哈族正常食管上皮細(xì)胞,獲得永生化細(xì)胞系,采用RT-PCR法檢測(cè)SV40-T抗原基因在永生化細(xì)胞中的表達(dá)。3MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖改變、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期改變、AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡改變。4高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定基因組DNA整體甲基化水平改變。5甲基化特異性聚合酶鏈(MSP)法檢測(cè)P16、FHIT、LRRFIP1、ALDHIL1基因甲基化狀態(tài)。6RT-PCR和Wersten Blot法檢測(cè)p16、FHIT、LRRFIP1、ALDHIL1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果：(1)原代細(xì)胞培養(yǎng)8～10d后匯合成片,呈鋪路石樣生長(zhǎng),免疫組織化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞角蛋白表達(dá)陽性；(2)通過轉(zhuǎn)染SV40-T獲得永生化哈族正常食管上皮細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)保持完好；(3)染毒后各組細(xì)胞抑制率均高于對(duì)照組(0μg/ml)；各組細(xì)胞G0+G1期比例低于對(duì)照組,而S期和G2+M期均高于對(duì)照組；中、高濃度組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比升高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；(4)中、高濃度組細(xì)胞基因組整體DNA甲基化水平低于對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；(5)高濃度組細(xì)胞DNMT1含量高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),各濃度組細(xì)胞DNMT1活性均高于對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；各濃度組細(xì)胞DNMT3a含量及DNMT3a活性均高于對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.05)；各濃度組細(xì)胞DNMT3b含量高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),高濃度組細(xì)胞DNMT3b活性高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.05)；(6)與對(duì)照組比較各濃度組細(xì)胞p16、FHIT、LRRFIP1基因甲基化狀態(tài)沒有改變；高濃度組細(xì)胞ALDH1L1基因有從部分甲基化向完全甲基化轉(zhuǎn)變的趨勢(shì)；(7)與對(duì)照組比較各濃度組細(xì)胞p16、FHIT、LRRFIP1、ALDHIL1、DNMT1、DNMT3α和DNMT3b mRNA及蛋白表達(dá)水平均升高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：(1)成功培養(yǎng)出原代哈族正常食管上皮細(xì)胞并建立了永生化哈族正常食管上皮細(xì)胞系。(2)MNNG抑制哈族正常食管上皮細(xì)胞增殖,將細(xì)胞周期阻滯在S期和G2+M期,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。(3)MNNG可降低哈族正常食管上皮細(xì)胞基因組DNA整體甲基化水平,使ALDH1L1基因從部分甲基化向完全甲基化轉(zhuǎn)變。(4)MNNG提高了DNMT1、DNMT3a和DNMT3b酶活性,為抑癌基因甲基化提供了基礎(chǔ)。MNNG對(duì)哈薩克族食管正常上皮細(xì)胞一般生物學(xué)及表觀遺傳學(xué)指標(biāo)有一定影響。
【關(guān)鍵詞】：哈薩克族 食管上皮細(xì)胞 原代培養(yǎng) MNNG 表觀遺傳
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-15
• 研究?jī)?nèi)容與方法15-37
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑15-16
• 1.1 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備15
• 1.2 主要試劑15-16
• 1.3 溶液配制16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-35
• 2.1 哈族正常食管上皮細(xì)胞原代培17-18
• 2.2 細(xì)胞永生化處理及鑒定18-22
• 2.3 染毒劑量的確定22
• 2.4 MNNG對(duì)細(xì)胞形態(tài)影響22
• 2.5 MNNG對(duì)細(xì)胞增殖的影響22-23
• 2.6 MNNG對(duì)細(xì)胞周期的影響23
• 2.7 MNNG對(duì)細(xì)胞凋亡的影響23
• 2.8 基因組DNA整體甲基化水平檢測(cè)23-25
• 2.9 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性檢測(cè)25-27
• 2.10 MSP法檢測(cè)p16、FHIT、LRRFIP1、ALDH1L1基因甲基化狀態(tài)27-30
• 2.11 p16、FHIT、LRRFIP1、ALDH1L1、DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的mRNA表達(dá)水平30-33
• 2.12 Western blot法檢測(cè)p16、FHIT、LRRFIP1、ALDH1L1、DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的蛋白表達(dá)33-35
• 3 質(zhì)量控制35
• 4 數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理35-36
• 5 技術(shù)路線36-37
• 結(jié)果37-74
• 討論74-82
• 小結(jié)82-83
• 致謝83-84
• 參考文獻(xiàn)84-91
• 綜述91-104
• 參考文獻(xiàn)100-104
• 攻讀碩士學(xué)棚間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文104-105
• 導(dǎo)師評(píng)閱表105

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：360549