發(fā)布時間：2022-01-14 07:12

　　一、研究背景隨著核能利用的日益廣泛,對電離輻射暴露的防護(hù)也逐漸的到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn),電離輻射可導(dǎo)致生物體細(xì)胞DNA損傷,繼而導(dǎo)致細(xì)胞遺傳物質(zhì)受損甚至細(xì)胞死亡。人體各種組織器官的輻射敏感性差異較大,雄性生殖系統(tǒng)的主要器官睪丸對電離輻射十分敏感,2Gy以上暴露于電離輻射可直接導(dǎo)致精原細(xì)胞,精原干細(xì)胞死亡,精曲小管內(nèi)皮損傷等。因此尋找雄性生殖系統(tǒng)輻射防護(hù)的新方法是一個亟待解決的科學(xué)問題。Toll樣受體（TLRs）是一類廣泛存在的模式識別受體,參與抗原識別,腫瘤免疫,抗病毒等多種病理生理過程。在人們尋找有效輻射防護(hù)方法的過程中,逐漸發(fā)現(xiàn),通過激活某些Toll樣受體可產(chǎn)生一定的輻射防護(hù)作用。這其中又以激活TLR4輻射防護(hù)效果最為顯著,提示TLR4在輻射防護(hù)中的重要作用。然而,傳統(tǒng)TLR4激動劑內(nèi)毒素（LPS）是一種由細(xì)菌細(xì)胞壁分離得到的成分,具有極強(qiáng)的免疫原性,由于毒性較大,嚴(yán)重制約了其在輻射防護(hù)中的應(yīng)用。在后續(xù)的研究中,人們通過水解反應(yīng)等一系列步驟,以LPS為原料,成功制備出一種減毒的TLR4激動劑,即單磷酰脂質(zhì)A（MPLA）。MPLA是一種高效的TLR4激動劑,目前主要作為免疫佐劑應(yīng)用于... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

1MPLA和LPS化學(xué)結(jié)構(gòu)圖

每日觀察，當(dāng)細(xì)胞克隆大小長至符合計(jì)數(shù)要求時（直徑 2-3mm，孵育時間約 1 周），棄去上清，使用 PBS 清洗 3 遍，吸凈 PBS，使用冰無水乙醇固定 3 分鐘，棄去無水乙醇，使用結(jié)晶紫染液染色 15-20 分鐘，到時后清水洗凈結(jié)晶紫，反扣曬干。進(jìn)行克隆計(jì)數(shù)并代入計(jì)算公式進(jìn)行克隆形成率計(jì)算。6. 統(tǒng)計(jì)方法：本實(shí)驗(yàn)所有數(shù)據(jù)均使用 GRAPH PAD 10 分析，組內(nèi)差異采用 t 檢驗(yàn)分析，組間差別采用單因素方差分析（ANOVA），每組內(nèi)至少設(shè)置 3 重復(fù)，P<0.05（*）或 P<0.01(**)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果（一）MPLA 減輕小鼠睪丸照射后的組織結(jié)構(gòu)損傷通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，照射前使用 MPLA 處理小鼠明顯減輕了小鼠照后 1 天，7 天及21 天睪丸的組織結(jié)構(gòu)損傷，具體表現(xiàn)為：MPLA 給藥組小鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)維持相對完整，精曲小管內(nèi)細(xì)胞充實(shí)，壞死細(xì)胞較少，空腔明顯少于單純照射組。另外，我們發(fā)現(xiàn)，MPLA 不對未照射小鼠的睪丸結(jié)構(gòu)產(chǎn)生明顯影響。

圖 2.3.2 MPLA 減輕照后第 21 天小鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)損傷）MPLA 有效緩解輻射導(dǎo)致的 2 倍體細(xì)胞數(shù)量減少生精小管內(nèi)單倍體細(xì)胞主要由分化完成的精子構(gòu)成，2 倍體細(xì)胞多為精原細(xì)胞4 倍體細(xì)胞則多是是精原細(xì)胞形成的初級精母細(xì)胞組成[20]。在照射后 24h，用流式細(xì)胞儀對小鼠睪丸內(nèi)細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)照射明顯導(dǎo)致 2 倍數(shù)量減少，提示照射主要對精原細(xì)胞起到殺傷作用，而使用 MPLA 則明顯緩射導(dǎo)致 2 倍體細(xì)胞數(shù)量減少這一趨勢，提示 MPLA 在體內(nèi)可對精原細(xì)胞起到射防護(hù)作用，并可能使更多細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞檢查點(diǎn)以增加 DNA 損傷修復(fù)機(jī)會。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3588062