目的:改革開放以來,隨著人們生活水平的不斷提高,中國人群的飲食方式逐步轉變?yōu)橐愿咧嬍碁橹鞯娜粘Ｉ攀?隨之出現(xiàn)肥胖、2型糖尿病、心腦血管疾病、炎性腸病、結直腸癌等飲食相關性疾病的發(fā)病率及死亡率逐年提高。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)腸道菌群結構及功能的改變在上述疾病中的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,并在某些疾病中已發(fā)現(xiàn)特征性核心菌群改變。本研究正是基于我國社區(qū)人口學、飲食及健康特征,探索社區(qū)高脂飲食健康人群在發(fā)生嚴重疾病之前的腸道菌群特征性改變,并試圖通過添加益生菌及膳食干預的方法改善腸道菌群結構,達到一級預防的目的。方法:（1）膳食模式、人口學、健康狀況的調查問卷及分組。在江陰市周莊鎮(zhèn)兩社區(qū)共招募健康成年人214人,采用食物頻率法調查過去1年每人每天進食的食物種類、量及頻次,根據(jù)《2017年中國食品成分表（第一冊第二版）》將所有食物折算成每日攝入脂肪、碳水化合物、蛋白質及纖維素的量,再以40%的脂肪供能比例為分組標準,大于等于40%的為高脂飲食組（HFD組）,小于40%的為低脂飲食組（LFD組）,再通過調查問卷的方式,調查人口學、健康狀況等其他九方面并進行比較。（2）糞便及結腸粘膜組織的采集。進行調查... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：136 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２〗６Ｓ?ｒＤＮＡ測序流程??１．２．５．３基因組ＤＮＡ提取和鑒定??

并保存于－８０°Ｃ冰箱。抽提得到ＤＮＡ基因組完整性用１％瓊脂糖凝膠電泳檢驗。??１．２．５．４?ＤＮＡ?擴增??采用細菌１６ＳｒＤＮＡＶ３－Ｖ４區(qū)作為靶標進行ＰＣＲ擴增（圖３）。擴增引物如??下：３１９Ｆ５’－ＡＣＴＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧ－３＇；?８０６Ｒ５＇－ＧＧＡＣＴＡＣＨＶＧＧＧＴＷ??ＴＣＴＡＡＴ－３’。擴增體系如表２所示。反應程序為：９８°Ｃ預變性３０秒；９８°Ｃ變性??１０秒，５４°Ｃ退火３０秒，７２°Ｃ延伸４５秒，執(zhí)行３５個循環(huán)；最后７２°Ｃ延伸１０分??鐘結束；１６°Ｃ放置１０分鐘。一輪擴增反應之后，在正反向引物兩端分別加上不??同的Ｂａｒｃｏｄｅｓ以區(qū)別不同的樣本，再進行下一輪擴增。擴增完成的ＰＣＲ產(chǎn)物??用ｂｅａｄｓ純化。用超純水代替樣本行ＰＣＲ擴增排除假陽性作為陰性對照。??２０??

１．２．６．１分析流程??本研究測序分析針對Ｉｌｌｕｍｉｎａ?Ｍｉｓｅｑ?２＞＜３００ｂｐ?ｐａｉｒｅｄ－ｅｎｄ測序數(shù)據(jù)進行分析??（圖４?）。對于Ｍｉｓｅｑ測序獲得的雙端數(shù)據(jù)，首先根據(jù)ｂａｒｃｏｄｅ信息進行樣本區(qū)分，??然后根據(jù)ｏｖｅｒｌａｐ關系進行ｍｅｒｇｅ拼接成ｔａｇ，接著對拼接完成的數(shù)據(jù)進行數(shù)據(jù)過??濾，然后進行Ｑ２０、Ｑ３０等質控分析。對最終獲得ｃｌｅａｎ數(shù)據(jù)進行可操作分類單??元（ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ?ｔａｘｏｎｏｍｉｃ?ｕｎｉｔ，ＯＴＵ）聚類分析和物種分類學分析。在物種分??類學上，利用公司獨特注釋工具對序列進一步精細到分類學上“種”的劃分。??２２??

【參考文獻】：
期刊論文
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