目的:改革開放以來,隨著人們生活水平的不斷提高,中國(guó)人群的飲食方式逐步轉(zhuǎn)變?yōu)橐愿咧嬍碁橹鞯娜粘Ｉ攀?隨之出現(xiàn)肥胖、2型糖尿病、心腦血管疾病、炎性腸病、結(jié)直腸癌等飲食相關(guān)性疾病的發(fā)病率及死亡率逐年提高。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)腸道菌群結(jié)構(gòu)及功能的改變?cè)谏鲜黾膊≈械陌l(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,并在某些疾病中已發(fā)現(xiàn)特征性核心菌群改變。本研究正是基于我國(guó)社區(qū)人口學(xué)、飲食及健康特征,探索社區(qū)高脂飲食健康人群在發(fā)生嚴(yán)重疾病之前的腸道菌群特征性改變,并試圖通過添加益生菌及膳食干預(yù)的方法改善腸道菌群結(jié)構(gòu),達(dá)到一級(jí)預(yù)防的目的。方法:（1）膳食模式、人口學(xué)、健康狀況的調(diào)查問卷及分組。在江陰市周莊鎮(zhèn)兩社區(qū)共招募健康成年人214人,采用食物頻率法調(diào)查過去1年每人每天進(jìn)食的食物種類、量及頻次,根據(jù)《2017年中國(guó)食品成分表（第一冊(cè)第二版）》將所有食物折算成每日攝入脂肪、碳水化合物、蛋白質(zhì)及纖維素的量,再以40%的脂肪供能比例為分組標(biāo)準(zhǔn),大于等于40%的為高脂飲食組（HFD組）,小于40%的為低脂飲食組（LFD組）,再通過調(diào)查問卷的方式,調(diào)查人口學(xué)、健康狀況等其他九方面并進(jìn)行比較。（2）糞便及結(jié)腸粘膜組織的采集。進(jìn)行調(diào)查... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：136 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２〗６Ｓ?ｒＤＮＡ測(cè)序流程??１．２．５．３基因組ＤＮＡ提取和鑒定??

并保存于－８０°Ｃ冰箱。抽提得到ＤＮＡ基因組完整性用１％瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn)。??１．２．５．４?ＤＮＡ?擴(kuò)增??采用細(xì)菌１６ＳｒＤＮＡＶ３－Ｖ４區(qū)作為靶標(biāo)進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增（圖３）。擴(kuò)增引物如??下：３１９Ｆ５’－ＡＣＴＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧ－３＇；?８０６Ｒ５＇－ＧＧＡＣＴＡＣＨＶＧＧＧＴＷ??ＴＣＴＡＡＴ－３’。擴(kuò)增體系如表２所示。反應(yīng)程序?yàn)椋海梗?#176;Ｃ預(yù)變性３０秒；９８°Ｃ變性??１０秒，５４°Ｃ退火３０秒，７２°Ｃ延伸４５秒，執(zhí)行３５個(gè)循環(huán)；最后７２°Ｃ延伸１０分??鐘結(jié)束；１６°Ｃ放置１０分鐘。一輪擴(kuò)增反應(yīng)之后，在正反向引物兩端分別加上不??同的Ｂａｒｃｏｄｅｓ以區(qū)別不同的樣本，再進(jìn)行下一輪擴(kuò)增。擴(kuò)增完成的ＰＣＲ產(chǎn)物??用ｂｅａｄｓ純化。用超純水代替樣本行ＰＣＲ擴(kuò)增排除假陽性作為陰性對(duì)照。??２０??

１．２．６．１分析流程??本研究測(cè)序分析針對(duì)Ｉｌｌｕｍｉｎａ?Ｍｉｓｅｑ?２＞＜３００ｂｐ?ｐａｉｒｅｄ－ｅｎｄ測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析??（圖４?）。對(duì)于Ｍｉｓｅｑ測(cè)序獲得的雙端數(shù)據(jù)，首先根據(jù)ｂａｒｃｏｄｅ信息進(jìn)行樣本區(qū)分，??然后根據(jù)ｏｖｅｒｌａｐ關(guān)系進(jìn)行ｍｅｒｇｅ拼接成ｔａｇ，接著對(duì)拼接完成的數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)過??濾，然后進(jìn)行Ｑ２０、Ｑ３０等質(zhì)控分析。對(duì)最終獲得ｃｌｅａｎ數(shù)據(jù)進(jìn)行可操作分類單??元（ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ?ｔａｘｏｎｏｍｉｃ?ｕｎｉｔ，ＯＴＵ）聚類分析和物種分類學(xué)分析。在物種分??類學(xué)上，利用公司獨(dú)特注釋工具對(duì)序列進(jìn)一步精細(xì)到分類學(xué)上“種”的劃分。??２２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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