建立了在線固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質譜（online SPE-LC-MS/MS）測定蘑菇中毒患者尿液中痕量α-鵝膏毒肽的分析方法。樣品經甲酸酸化的乙腈-甲醇（5∶1, v/v）沉淀蛋白質,反相液液微萃取去除樣品提取液中的有機溶劑,毒素經ODS微柱（5 mm×2.1 mm, 5μm）在線SPE凈化,XBridge^TM BEH C₁₈色譜柱（150 mm×3.0 mm, 2.5μm）分離,MS/MS測定。采用基于定量環(huán)的快速閥切換技術作為在線SPE和LC-MS/MS模塊的接口,使得兩個分離模塊互相獨立,無論是流動相還是壓力,都不會互相干擾,保證了系統(tǒng)的穩(wěn)定性;在線系統(tǒng)的精準凈化,有效消除了后續(xù)質譜檢測的基質效應,確保了尿液中痕量水平α-鵝膏毒肽的定性定量檢測。尿液中α-鵝膏毒肽在0.1～50μg/L范圍內線性關系良好,相關系數(shù)（r²）為0.998 3;檢出限（LOD）為0.03μg/L;α-鵝膏毒肽的加標（0.1、2.0和20μg/L）平均回收率為84.3%～91.7%,相對標準偏差（RSD）為3.8%～7.2%。體內鵝膏毒... 

【文章來源】：色譜. 2020,38(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

在線SPE-LC-MS/MS系統(tǒng)流路切換示意圖

在線SPE分離除了實現(xiàn)高效的凈化,還要保證洗脫液與后續(xù)LC-MS/MS進樣分離的兼容性,關鍵是要保證較窄的SPE洗脫色譜峰,以滿足后續(xù)200 μL定量環(huán)的收集容量,以及需要保證洗脫液中較低比例的有機相,以防止后續(xù)液相色譜分離時的峰展寬。實驗中,將圖1中色譜流動相流速設為0 mL/min, SPE模塊按正常分析,將廢液端直接連接到質譜儀,以監(jiān)測在線SPE的分離效果。改變在線SPE洗脫梯度程序中2.0～3.0 min時甲醇的比例,使其分別為30%、35%和40%,結果見圖2。按流速0.5 mL/min 計算,甲醇比例為30%時,收集2.05～2.45 min的洗脫液正好滿足定量環(huán)的收集容量,且此時有機相比例最低。2.3 在線SPE與LC-MS/MS切換

根據(jù)文獻[16]報道的離線SPE柱(HLB柱,60 mg/3 mL,美國Waters公司)凈化方法操作,結果見圖3c,其響應值低于在線凈化的50%,且離線凈化后的基線噪聲太高,在0.5 μg/L 這個水平很難分辨是否為α-鵝膏毒肽陽性。2.5 質譜檢測

【參考文獻】：
期刊論文
[1]血漿和尿液中6種鵝膏毒肽和鬼筆毒肽的超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法測定[J]. 肖紹震,林鋒,傅武勝,魏道智.  食品科學. 2018(22)
[2]12種劇毒鵝膏菌的肽類毒素成分鑒定及其相對含量差異比較研究[J]. 魏佳會,吳劍峰,陳佳,吳弼東,陳作紅,劉暢,謝劍煒.  分析化學. 2017(06)
[3]在線液相色譜-二極管陣列檢測器-串聯(lián)質譜法檢測野生菌中鵝膏毒肽和鬼筆毒肽[J]. 徐小民,張京順,蔡增軒,張晶,黃百芬,許嬌嬌,陳苘.  色譜. 2017(06)
[4]超高效液相色譜三重四極桿質譜聯(lián)用法快速檢測尿液和血漿中鵝膏毒肽和鬼筆毒肽[J]. 張秀堯,蔡欣欣.  分析化學. 2010(01)
[5]我國28種鵝膏菌主要肽類毒素的檢測分析[J]. 陳作紅,胡勁松,張志光,張平,李東屏.  菌物系統(tǒng). 2003(04)



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