目的:從細(xì)胞水平,探討與驗證Foxp3基因啟動子區(qū)甲基化在砷對人淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用中的影響,并進行針對性干預(yù),以期為砷中毒機制的完善、尋找可靠的干預(yù)措施提供科學(xué)依據(jù)。方法:（1）染毒試驗:密度梯度法分離培養(yǎng)健康成人外周血淋巴細(xì)胞,用0.00、5.00、10.00、20.00、30.00、40.00μmol/L的亞砷酸鈉（Sodium arsenite,NaAsO₂）染毒24 h,MTT比色法檢測細(xì)胞相對存活率,HE染色鑒定染毒模型;實時熒光定量（RT-qPCR）檢測叉頭轉(zhuǎn)錄因子3（forkhead/winged helix transcription factor,Foxp3）,DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1（DNA methltransferases1,DNMT1）mRNA的轉(zhuǎn)錄水平;免疫印跡法（Western blot）檢測Foxp3、DNMT1的蛋白表達(dá)水平。亞硫酸氫鹽（BisμLfite sequencing,BSP）測序法檢測Foxp3基因啟動子區(qū)域甲基化狀態(tài),流式細(xì)胞分析儀檢測調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regμLatory T cell,Treg）占CD4⁺

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

外周血單個核細(xì)胞的細(xì)胞層分離

圖 2-2 總 RNA 凝膠電泳圖Fig.2-2 Total RNAgel electrophoresis figureR 反應(yīng)曲線，溶解曲線-4 可知，內(nèi)參基因和 Foxp3 基因擴增曲線，證明所有基因的擴增為特異性，無引物圖 2-3 GADPH 基因?qū)崟r熒光定量擴增曲線及溶曲線熔解曲線

[注]*：與對照組相比，P<0.05圖 2-5 NaAsO2染毒對人淋巴細(xì)胞 Foxp3 mRNA 轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響5 Transcriptional expression levels of Foxp3 gene in lymphocytes exposed to NaAsO2NaAsO2染毒對人淋巴細(xì)胞 Foxp3 蛋白表達(dá)的影響圖 2-6 所示，隨著亞砷酸鈉染毒濃度的升高，淋巴細(xì)胞 Foxp3 蛋白表達(dá)水降趨勢（rFoxp3蛋白表達(dá)水平=－0.945，P<0.05）；與對照組相比，各染毒組 的蛋白表達(dá)水平均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

【參考文獻】：
期刊論文
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[10]重視燃煤污染型地方性砷中毒的防治管理[J]. 安冬.  中華地方病學(xué)雜志. 2015 (01)

碩士論文
[1]5-Aza-CdR對B-ALL細(xì)胞系NALM-6的作用及其對miRNA影響的研究[D]. 石懿玉.山西醫(yī)科大學(xué) 2014
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本文編號：3280180