目的本研究通過建立多巴胺能神經(jīng)元體外模型（SH-SY5Y）,采用相關(guān)生物學(xué)技術(shù),觀察百草枯（Paraquat,PQ）對(duì)多巴胺能神經(jīng)元自噬功能的影響;探討高遷移率族蛋白1（high mobility group box-1 protein,HMGB1）和α-突觸核蛋白（α-synuclein）是否為PQ影響神經(jīng)元自噬功能的貢獻(xiàn)因子;最后闡明HMGB1通過調(diào)控α-synuclein表達(dá)參與多巴胺能神經(jīng)元自噬抑制的機(jī)制。方法選取人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SH-SY5Y）作為多巴胺能神經(jīng)元的體外模型,不同濃度PQ處理細(xì)胞24 h以及150μmol/L PQ處理細(xì)胞不同時(shí)間,CCK8法檢測(cè)PQ對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞增殖活性的影響;分光光度法檢測(cè)細(xì)胞上清中LDH的活力;免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)PQ處理后細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白（LC3I、LC3II、Beclin1、Vps34、p62）、α-synuclein和HMGB1蛋白表達(dá)水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測(cè)α-synuclein和HMGB1基因表達(dá)水平;單丹磺酰尸胺（MDC）染色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)自噬小體的變化;免疫熒光法（Immu... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PQ對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞增殖活性的影響(n=5)

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 第一部分

圖 2 PQ 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞上清中 LDH 活性的影響(n=3) 3. PQ 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較，隨著 PQ 染毒濃度的增加，LC3II 蛋白表達(dá)水平明顯減少，自噬標(biāo)記蛋白 LC3II/LC3I 的比值明顯降低，自噬相關(guān)蛋白 Beclin1 和 Vps34蛋白表達(dá)水平下降，自噬降解底物 p62 蛋白表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖 3。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]AMPK-mTOK信號(hào)通路參與百草枯致PC12細(xì)胞的自噬抑制作用[J]. 許延龍,武坷鑫,王前,于普光,蘇小明,黃敏.  中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志. 2018 (11)
[2]百草枯誘導(dǎo)小鼠α-突觸核蛋白表達(dá)升高并聚集的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 杜蕓蘭,劉振國(guó),陳生弟,陸國(guó)強(qiáng),胡慶沈.  中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志. 2005(01)

博士論文
[1]自噬在系統(tǒng)性炎癥所致黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元損傷中的作用及機(jī)制研究[D]. 鄭慧芬.蘇州大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3251222