目的研制一種質(zhì)粒DNA參考物質(zhì),包含副溶血性弧菌檢測常用的目的靶基因——耐熱直接溶血素（tdh）、不耐熱直接溶血素（tlh）、和耐熱相關(guān)溶血素（trh）、跨膜轉(zhuǎn)錄激活蛋白（toxR）基因序列,為副溶血性弧菌病原體的快速鑒定提供相關(guān)技術(shù)支持。方法使用人工DNA合成技術(shù)合成所需目的基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒,并對其純度、均勻性、穩(wěn)定性、標(biāo)準(zhǔn)值、不確定度及在實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）中的應(yīng)用進(jìn)行評價(jià)。結(jié)果質(zhì)粒DNA參考物質(zhì)的純度高,均勻性、穩(wěn)定性良好,可用于檢測副溶血性弧菌的的熒光定量PCR檢驗(yàn),與傳統(tǒng)的基因組核酸參考品有可比性。結(jié)論該質(zhì)粒DNA參考物質(zhì)適用于以tdh、trh、tlh及toxR基因?yàn)榘袠?biāo)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測,為病原體的定性定量檢測提供了技術(shù)支持,保證了檢測結(jié)果的可靠性和可比性。 

【文章來源】：分子診斷與治療雜志. 2020,12(11)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒構(gòu)建
    1.2 純度檢驗(yàn)
    1.3 均勻性研究
    1.4 穩(wěn)定性研究
    1.5 標(biāo)準(zhǔn)值的確定
    1.6 標(biāo)準(zhǔn)值的不確定度評估
    1.7 q PCR實(shí)驗(yàn)
    1.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 質(zhì)粒序列的準(zhǔn)確性驗(yàn)證
    2.2 純度驗(yàn)證
    2.3 均勻性檢驗(yàn)
    2.4 穩(wěn)定性檢驗(yàn)
    2.5 標(biāo)準(zhǔn)值的確定
    2.6 標(biāo)準(zhǔn)值的不確定度評估
    2.7 q PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.8 質(zhì)粒DNA參考物質(zhì)與副溶血性弧菌基因組DNA(g DNA）的可替代性研究
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]132株副溶血性弧菌毒力基因及耐藥性分析[J]. 呂蓓,吳龍飛,張英英,喬春艷,張軼,李秋月.  中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志. 2020(08)
[2]耳聾基因突變檢測國家參考品的研制[J]. 于婷,孫楠,曲守方,黃杰.  分子診斷與治療雜志. 2020(01)
[3]用于篩查轉(zhuǎn)基因作物成分的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子的研制[J]. 肖維威,張寶,趙衛(wèi),朱利,吳清華.  生命科學(xué)研究. 2019(03)
[4]82株副溶血性弧菌毒力基因及耐藥性分析[J]. 季霄雷,許海燕,蘇婧,張偉,茅麗婷,熊海平,趙哲,郭陳.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2018 (01)
[5]肉制品中沙門菌實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的構(gòu)建[J]. 於穎,顧其芳,陳敏,張紅芝.  上海預(yù)防醫(yī)學(xué). 2017(04)
[6]不同雙歧桿菌標(biāo)準(zhǔn)品制備法的比較研究[J]. 高曉琳,賈瑞貞,謝亮,曠凌寒,馮玲,萬朝敏.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016(04)
[7]副溶血弧菌檢測方法研究進(jìn)展[J]. 溫燦,顧小松,王榮智.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2015(07)
[8]一種質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及不確定度評定[J]. 許麗,梁文,李妍,任淑貞,丁敏,劉剛.  中國測試. 2014(S1)
[9]H7亞型禽流感病毒核酸標(biāo)準(zhǔn)品制備及雙探針熒光RT-PCR檢測研究[J]. 高志強(qiáng),張鶴曉,蒲靜,張偉,谷強(qiáng),喬彩霞,張利峰,汪琳.  中國獸醫(yī)雜志. 2014(11)
[10]多重?zé)晒釶CR檢測水產(chǎn)品致病菌方法的建立與應(yīng)用研究[J]. 許如蘇,林志雄,林彩華,陳冠武,蔡穎,陳其生,楊奇志.  廣東畜牧獸醫(yī)科技. 2011(04)



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