目的研制一種質(zhì)粒DNA參考物質(zhì),包含副溶血性弧菌檢測常用的目的靶基因——耐熱直接溶血素（tdh）、不耐熱直接溶血素（tlh）、和耐熱相關(guān)溶血素（trh）、跨膜轉(zhuǎn)錄激活蛋白（toxR）基因序列,為副溶血性弧菌病原體的快速鑒定提供相關(guān)技術(shù)支持。方法使用人工DNA合成技術(shù)合成所需目的基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒,并對其純度、均勻性、穩(wěn)定性、標準值、不確定度及在實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qPCR）中的應用進行評價。結(jié)果質(zhì)粒DNA參考物質(zhì)的純度高,均勻性、穩(wěn)定性良好,可用于檢測副溶血性弧菌的的熒光定量PCR檢驗,與傳統(tǒng)的基因組核酸參考品有可比性。結(jié)論該質(zhì)粒DNA參考物質(zhì)適用于以tdh、trh、tlh及toxR基因為靶標實時熒光定量PCR檢測,為病原體的定性定量檢測提供了技術(shù)支持,保證了檢測結(jié)果的可靠性和可比性。 

【文章來源】：分子診斷與治療雜志. 2020,12(11)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒構(gòu)建
    1.2 純度檢驗
    1.3 均勻性研究
    1.4 穩(wěn)定性研究
    1.5 標準值的確定
    1.6 標準值的不確定度評估
    1.7 q PCR實驗
    1.8 標準曲線的建立
    1.9 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 質(zhì)粒序列的準確性驗證
    2.2 純度驗證
    2.3 均勻性檢驗
    2.4 穩(wěn)定性檢驗
    2.5 標準值的確定
    2.6 標準值的不確定度評估
    2.7 q PCR標準曲線的建立
    2.8 質(zhì)粒DNA參考物質(zhì)與副溶血性弧菌基因組DNA(g DNA）的可替代性研究
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3164798