抗生素因具有良好的抑菌、殺菌作用被廣泛應用于醫(yī)藥、農業(yè)和畜牧業(yè)領域。然而,被使用的抗生素高達75%被人體或動物排出體外進入環(huán)境,短時期內環(huán)境中抗生素難以降解導致大量的抗生素殘留,使環(huán)境中的很多微生物產生耐藥性,甚至引發(fā)了超級細菌的產生。除抗生素外,一些金屬抗菌劑也被廣泛應用于醫(yī)藥和農業(yè)等領域,相較于抗生素環(huán)境中的金屬更難降解,不斷地累積致使金屬耐藥菌株產生。為了增強抑菌效果,醫(yī)藥或農業(yè)領域會聯合應用抗生素與金屬藥劑,可能催生抗生素與金屬聯合抗性細菌的出現。城市污水河道受人為活動的影響,可能作為抗性細菌的儲庫,給人類健康帶來巨大威脅,研究河道中指示細菌的抗性分布情況,對于評估水環(huán)境受抗性細菌污染情況及潛在傳播風險具有重要意義。本研究以中國寒區(qū)城市污水河道污泥為研究對象,首先解析腸桿菌科細菌組成,然后以腸桿菌科細菌的代表菌種大腸桿菌（Escherichia coli）為指示菌,研究了 17種抗生素和4種金屬的耐藥情況,并檢測了相應的19種抗性相關基因及整合酶基因。研究結果如下:（1）在城市河道淤泥樣品中,共分離出455株腸桿菌,鑒定結果顯示包括Escherichia、Citrobacter... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１采樣點位置圖??２．２．２實驗藥品與試劑???—?藥品名稱?來源??蛋白胨?北京奧星生物技術有限責任公司??

育樹分析??取在０的片段處顯色的ＰＣＲ產物，郵寄至哈爾濱擎科生物公司進行測序，待序列??返回后進行Ｇｅｎｂａｎｋ數據庫比對。利用Ｍｅｇａ?６．０軟件對所獲得的序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹。??２．３結果與分析??２．３．１腸桿菌科細菌的分離結果??２０１８年６月，利用紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂（ＶＲＢＧ）從哈爾濱市馬家溝河４個樣點屮??共分離出４５５株腸桿菌，分別是Ｓ１?１３８株，Ｓ２?１４７株，Ｓ３?９２株，Ｓ４?７８株。具體實驗??結果如下：??河道污泥經稀釋，在紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂上生長情況如圖２－２所示，可發(fā)現菌落呈??現出深紫紅色，多分布于培養(yǎng)基表面和培養(yǎng)基中層，腸桿菌的微好氧和厭氧生活習性決??定了其在培養(yǎng)基中的生長分布情況。??圖２－２紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂對腸桿菌的分離結果。ａ：?稀釋液：ｂ：?１（＾稀釋液。??挑取上述平板上的深紫紅色菌落，作劃線純化，獲得純化Ｕ的菌落。閣２－３顯示的??－１１．??

?東北林業(yè)大學碩士學位論文???是分離的代表性菌落，將劃線分離后的腸桿菌進行液體培養(yǎng)，并用甘油冷凍法存于－??８０?°Ｃ冰箱待用。??圖２－３腸桿菌平板劃線純化結果??２．３．２?￡．?ｃｏ／／篩選結果??利用ＴＢＸ培養(yǎng)基顯色、吲哚試驗、氧化酶試驗從４５５株腸桿菌共篩選出１１０株￡??亡必，在四個樣點的分布為３１２９株，８２?３０株，８３〗７株，５４?３４株。??２．３．２．１?ＴＢＸ培養(yǎng)基顯色??挑�。玻玻鄙系陌咨溆冢颍幔囵B(yǎng)基上進行劃線處理，生長情況如圖２－４所示，??經觀察，可發(fā)現圖２－４－ａ上菌落呈藍色，圖２－４－ｂ上菌落呈白色，￡．ｃｏ／／中的ｐ－葡萄糖苷??酶（Ｐ－葡萄糖苷酶基因編碼）可分解培養(yǎng)基中的Ｘ－葡萄糖苷酸（Ｘ－ｇｌｕｃ）產生深藍色物??質５－溴－４－靛藍，可判斷藍色菌落可能為尺ｃｏ／／，需進一步的吲哚試驗和氧化酶試驗驗證。??ｉｐ?ｎ??ｗ?Ｉ??，．￡／?，ｒｉ??圖２－４?ＴＢＸ培養(yǎng)基顯色結果??２＿３．２．２吲哚試驗??挑�。玻玻玻鄙系乃{色菌落于含有蛋白胨水培養(yǎng)液的螺紋管中，３７?°Ｃ培養(yǎng)２４?ｈ后，??進行吲哚試驗驗證，結果如圖２－５所示，可發(fā)現菌液上的乙醚層呈現出玫瑰紅色，Ｅ??ｃｏ／ｆ所產生的色氨酸酶分解蛋白胨水溶液中的色氨酸產生吲哚和丙酮酸，吲哚與乙醚層??－１２－??

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]龜裂鏈霉菌土霉素途徑特異激活子OtcR功能及應用研究[D]. 尹守亮.中國礦業(yè)大學(北京) 2017
[3]碳青霉烯不敏感大腸桿菌分子特征及NDM-1適應性代價研究[D]. 徐國鋒.東北農業(yè)大學 2015

碩士論文
[1]城市水環(huán)境中抗生素及抗性基因污染特征研究[D]. 孫王茹.河北工程大學 2019
[2]環(huán)境水樣中四環(huán)素的電化學分析方法研究[D]. 孫雪梅.成都理工大學 2017
[3]城市污水中腸桿菌的抗生素耐藥性和多種耐藥基因的檢測[D]. 張博.東北農業(yè)大學 2013



本文編號：3114756