本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路在十溴聯(lián)苯醚致小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系HT-22細(xì)胞凋亡中作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 研究十溴聯(lián)苯醚（decabromodiphenyl ether，BDE-209）暴露對小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系（HT-22細(xì)胞）的細(xì)胞生長形態(tài)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞存活率、細(xì)胞凋亡損傷和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路中的相關(guān)蛋白caspase12、GRP78、PERK蛋白表達(dá)水平的影響，初步討論BDE-209對HT-22細(xì)胞凋亡的影響和誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制，為研究BDE-209致HT-22細(xì)胞凋亡的機(jī)制提供依據(jù)。 方法 培養(yǎng)HT-22細(xì)胞之后暴露于BDE-209中，總共分為6個(gè)劑量組，分別為對照組（含有1%DMSO的培養(yǎng)基）和劑量組（劑量分別為6.25μg/ml BDE-209、12.5μg/mlBDE-209、25μg/ml BDE-209、50μg/ml BDE-209、100μg/ml BDE-209）。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè)置3個(gè)平行樣。染毒24小時(shí)之后在倒置顯微鏡下觀察每組的細(xì)胞形態(tài)差異；MTT比色分析法檢測每組細(xì)胞存活率；Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡情況；采用免疫印跡法檢測HT-22細(xì)胞中caspase12、GRP78、PERK蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果 倒置顯微鏡觀察各個(gè)處理組的HT-22細(xì)胞形態(tài)，實(shí)驗(yàn)組可以觀察到細(xì)胞形態(tài)有所變形，細(xì)胞胞膜有發(fā)泡現(xiàn)象，隨著染毒劑量的增加，神經(jīng)突起變短，細(xì)胞空泡增加。在C（12.5μg/ml BDE-209）、D（25μg/ml BDE-209）、E（50μg/ml BDE-209）染毒劑量組可以看到細(xì)胞有明顯的皺縮、空泡、脫落、消失。在F（100μg/mlBDE-209）染毒劑量組中細(xì)胞幾乎已經(jīng)完全脫落。MTT比色法檢測HT-22細(xì)胞存活率，不同劑量染毒24小時(shí)與對照組相比，染毒劑量組細(xì)胞存活率顯著下降，其中染毒劑量為12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；同一劑量BDE-209染毒不同時(shí)間時(shí)細(xì)胞存活率也相應(yīng)下降，染毒時(shí)間為8小時(shí)、12小時(shí)、16小時(shí)、20小時(shí)、24小時(shí)、30小時(shí)的細(xì)胞存活率與對照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡情況，用試劑盒進(jìn)行染色之后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示：隨著染毒劑量的增加，分布在第二象限的早期凋亡細(xì)胞和第三象限的晚期凋亡細(xì)胞的比例呈現(xiàn)增加的趨勢，而第一象限的正常細(xì)胞的比例則逐漸減少。免疫印跡結(jié)果顯示：染毒劑量為12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml組與對照組之間caspase12、GRP78、PERK蛋白表達(dá)增加，caspase12/β-actin、GRP78/β-actin、PERK/β-actin之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論 BDE-209染毒可以導(dǎo)致HT-22細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變和存活率的顯著降低，并與BDE-209的染毒時(shí)間和劑量呈現(xiàn)一定的時(shí)間和劑量效應(yīng)關(guān)系。BDE-209暴露可以導(dǎo)致HT-22細(xì)胞凋亡，并引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白caspase12、GRP78、PERK的表達(dá)增加。
【關(guān)鍵詞】：十溴聯(lián)苯醚 HT-22細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-13
• 1 前言13-16
• 2 材料與方法16-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞16
• 2.2 儀器設(shè)備16-17
• 2.3 主要試劑17-18
• 2.4 細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞蛋白上清提取18-19
• 2.5 總蛋白含量的測定19-20
• 2.6 細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備20-21
• 2.7 BDE-209 處理21
• 2.8 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的 western blot 檢測21-25
• 2.9 MTT 檢測細(xì)胞毒性25-26
• 2.10 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡-Annexin V/PI 雙染色法26-27
• 2.11 圖像獲取及數(shù)據(jù)處理27
• 3 結(jié)果27-35
• 3.1 BDE-209 染毒對小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系（HT-22）細(xì)胞形態(tài)的影響27-28
• 3.2 BDE-209 不同染毒劑量和不同的染毒時(shí)間對 HT-22 細(xì)胞存活率的影響28-31
• 3.3 BDE-209 染毒對 HT-22 細(xì)胞凋亡水平的影響31-32
• 3.4 BDE-209 染毒對 HT-22 細(xì)胞中 Casepase12、GRP78、PERK 蛋白表達(dá)水平的影響32-35
• 4 討論35-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-47
• 附錄47-49
• 致謝49-50
• 綜述50-66
• 參考文獻(xiàn)59-66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：300361