食品安全是全球性的熱點問題,而食源性致病菌是導(dǎo)致食品安全問題頻發(fā)的主要原因。目前檢測食源性致病菌的金標(biāo)準(zhǔn)仍然以傳統(tǒng)培養(yǎng)法為主,該方法耗時較長且操作繁復(fù),影響結(jié)果判別的時效性,也與食源性致病菌的快速識別檢測理念相悖,因此建立快速靈敏的致病菌檢測技術(shù)具有重要意義�？股卮欧蛛x（Antibiotic magnetic separation,AMS）是一種簡單快速的致病菌富集前處理手段,是將抗生素作為識別分子直接或間接的修飾在磁性粒子表面從而非靶向捕獲細(xì)菌,并在外部磁場作用下富集分離,省去了細(xì)菌預(yù)增菌培養(yǎng)所需要的時間。此外,抗生素磁分離較免疫磁分離相比成本更低,性質(zhì)更穩(wěn)定,因而其在食源性致病菌檢測中具有較好的應(yīng)用前景。本研究選用萬古霉素（Vancomycin,Van）修飾的納米磁珠（Magnetic nanobeads,MBs）作為食源性致病菌分離富集前處理手段,結(jié)合滾環(huán)擴增（Rolling circle amplification,RCA）制備的DNA納米花（DNA flowers,DNFs）或RCA單鏈產(chǎn)物,在不需要提取目的菌DNA模板的情況下,負(fù)載酶或熒光染料,實現(xiàn)對金黃色葡萄球菌（St... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．２?Ｖａｎ－ＭＢｓ捕獲５１．?的表征??

及ＲＣＡ反應(yīng)體系＿在之前的研究??中己經(jīng)進(jìn)行過優(yōu)化，所以本研宄所建立的Ｖａ?ｎ?－?Ｍ?Ｂ?ｓ結(jié)合普通比色法檢測Ｓ??ｆｌｗｒｅｗ，對ｂｉｏｔｉｎ－ｌｇＧ濃度、ＳＡ－ＨＲＰ用量進(jìn)行了優(yōu)化，以期獲得最佳檢測結(jié)??果。??２．４．３．１?Ｂｉｏｔｉｎ－ＩｇＧ?濃度的優(yōu)化??在檢測中，Ｂｉｏｔｉｎ－ＩｇＧ用量過少，會導(dǎo)致多數(shù)細(xì)菌無法與Ｂｉｏｔｉｎ－ＩｇＧ結(jié)合，??造成較大的實驗誤差，而Ｂｉｏｔｉｎ－ＩｇＧ過多又會造成一定程度的試劑浪費，因??此對于Ｂｉｏｔｉｎ－ＩｇＧ的用量進(jìn)行了優(yōu)化。如圖２．４所示，當(dāng)Ｂｉｏｔｉｎ－ＩｇＧ的濃度為??５?ｎＭ時能得到最高的ＡＯＤ。因此，后續(xù)實驗選用Ｂｉｏｔｉｎ－ＩｇＧ的濃度為５?ｎＭ??為最佳濃度。??０．２５－１???０．２０－??１０．１５－??０．０５－??０．００?Ｊ?．???．?１???０?３?６?９?１２?１５??Ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｂｉｏｔｉｎ－ＩｇＧ?（ｎＭ）??圖２．３?Ｂｉｏｔｉｎ－ＩｇＧ濃度的優(yōu)化??Ｆｉｇｕｒｅ?２．３?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｂｉｏｔｉｎ－ＩｇＧ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ??２．４．３＿２?ＳＡ－ＨＲＰ濃度的優(yōu)化??本研究對ＳＡ－ＨＲＰ的用量也進(jìn)行了優(yōu)化。如圖２．４所示，隨著ＳＡ－ＨＲＰ??的濃度從４０?ｎｇ／ｍＬ增加到１２０?ｐｇ／ｍＬ，?ＡＯＤ也隨之增加，隨后隨著濃度的增??加略微下降。因此，后續(xù)實驗選用ＳＡ－ＨＲＰ的濃度為１２０?ｐｇ／ｍＬ為最佳濃度。??２６??

?第２章Ｖａｎ－ＭＢｓ－ＤＮＦｓ信號放大比色技術(shù)檢測金黃色葡萄球菌的研究???０．２５????§?０．Ｈ３．?／??０．０５?＿?Ｙ??０．００??？?ｉ?．???０?６０?１２０?１８０?２４０??Ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＡ－ＨＲＰ?（ｐｇ／ｍＬ）??圖２．４ＳＡ－ＨＲＰ濃度的優(yōu)化??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＡ－ＨＲＰ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ??２．４．４純菌液中Ｖａｎ－ＭＢｓ結(jié)合普通比色法靈敏度的確定??結(jié)合上述實驗中的最優(yōu)參數(shù)，本研宄對Ｖａｎ－ＭＢｓ結(jié)合普通比色法在純菌??液中的檢測范圍和ＬＯＤ值進(jìn)行了確定。如圖２．５所示，隨著義ａｗｒｅｗ濃度的??逐漸增加ＯＤ值也隨之增大，該研究判斷陽性的依據(jù)是：陰性樣本的平均ＯＤ??值＋３ｃｒ值（〇為標(biāo)準(zhǔn)偏差），因此，當(dāng)待測菌濃度的０Ｄ值高于空白值的平均??ＯＤ值＋３〇值時，即為檢測結(jié)果為陽性。因此，該方法在ＰＢＳ中的ＬＯＤ值為??３＿３ｘｌ〇５?ＣＦＵ／ｍＬ。??０．５－１???｜?〇－３－?＇／：ｉ｜??Ｃｏｎｔｒｏｌ?４?５?６?７?８??Ｃｏｏｃｅｎｔｉ?ａｔｉｏｎ?ｏｉＳ．?ａｕｒｅｕｓ?（３．３?Ｘ?ｌｇ?ＣＦＵ／ｎｉＬ）??圖２．５?Ｖａｎ－ＭＢｓ結(jié)合普通比色法ＰＢＳ緩沖液中ＬＯＤ值的確定??Ｆｉｇｕｒｅ?２．５?Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬＯＤ?ｂｙ?Ｖａｎ－ＭＢｓ?ｃｏｍｂｉｎｅｄ?ｗｉｔｈ?ｃｏｍｍｏｎ?ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ?ｉｎ?ＰＢＳ??ｂｕｆｆｅｒ??２７??


本文編號：2965790