發(fā)布時(shí)間：2021-01-05 01:55

　　目的:以小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞（MN9D）為模型,探討雷帕霉素在調(diào)控錳誘導(dǎo)MN9D細(xì)胞凋亡中的作用及可能機(jī)制,探討mTOR信號(hào)通路在雷帕霉素調(diào)控錳誘導(dǎo)MN9D細(xì)胞凋亡中作用及其可能機(jī)制,為防治職業(yè)人群錳中毒提供研究基礎(chǔ)。方法:1.MN9D細(xì)胞在雷帕霉素（0.1μg/ml）預(yù)處理1h后分別暴露1.2和2.4m M錳24h。然后,觀察細(xì)胞形態(tài)、臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)量、Annexin V/PI雙染色后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率、Western blot分析MN9D細(xì)胞caspase-3激活程度。2.MN9D細(xì)胞在雷帕霉素RAP（0.1μg/ml）/mTOR激動(dòng)劑MHY（1μM）預(yù)處理1h后暴露1.2 m M錳24h。然后,觀察細(xì)胞形態(tài)、臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)量、Annexin V/PI雙染色后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率、western blot分析MN9D細(xì)胞caspase-3激活和mTOR相關(guān)蛋白變化。結(jié)果:1.與對(duì)照組相比,錳以濃度依賴的方式誘導(dǎo)MN9D細(xì)胞活性下降和形態(tài)改變,凋亡率逐漸升高,cleaved-caspase-3蛋白表達(dá)量也逐漸升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同時(shí)間和濃度錳對(duì)MN9D細(xì)胞活力的影響

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 李光輝concentration(P<0.05，在兩個(gè)時(shí)間段與對(duì)照組相比)數(shù)據(jù)用 表示（n=3）。2.2 雷帕霉素削弱錳誘導(dǎo) MN9D 細(xì)胞活性下降和形態(tài)改變由圖 2 顯示，MN9D 細(xì)胞在 1.2 和 2.4mM 錳處理 24h 后，與對(duì)照組相比，細(xì)胞活性急劇下降（圖 A），細(xì)胞形態(tài)皺縮變圓（圖 B），而與雷帕霉素(Rap)聯(lián)合處理后這些現(xiàn)象得到了明顯緩解。由此可見(jiàn)，錳明顯導(dǎo)致 MN9D 細(xì)胞受損死亡，而雷帕霉素逆轉(zhuǎn)錳致細(xì)胞存活率下降。x s

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 李光輝數(shù)據(jù)用 表示（n=3）。avs Control，P<0.05；bvs 1.2 mM Mn，P<0.05；cvs 2.4 mM Mn，P<0.05。2.3 雷帕霉素抵抗錳誘導(dǎo) MN9D 細(xì)胞凋亡采用 Annexin V/PI 雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各分組 MN9D 細(xì)胞凋亡。如圖 3 所示，隨著錳染毒濃度的逐漸增高，細(xì)胞的凋亡率也隨之增加。而與雷帕霉素(Rap)聯(lián)合處理后凋亡率則明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。由此可見(jiàn)，雷帕霉素對(duì)錳誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有明顯的抑制作用。（圖 4）x s


本文編號(hào)：2957786