目的評價轉人乳鐵蛋白基因水稻（genetically modified rice with human lactoferrin gene, hLF）的營養(yǎng)成分、鐵的生物利用率及對大鼠缺鐵性貧血的改善作用；觀察重組人乳鐵蛋白的（recombinant human lactoferrin gene, rhLF）致敏性和毒性,以評價從轉hLF水稻提取純化后的人乳鐵蛋白的食用安全性；觀察rhLF在體外的抑菌效果和在小鼠體內(nèi)抑制沙門氏菌感染的效果,以評價rhLF的特殊功效；評價轉GmDREB1/TaDREB4基因抗旱小麥的營養(yǎng)學價值。材料與方法1轉人乳鐵蛋白基因水稻的營養(yǎng)成分和特殊功效評價1.1營養(yǎng)成分分析和乳鐵蛋白的檢測采用國標方法測定轉hLF水稻和親本對照水稻的蛋白質、碳水化合物、脂肪、纖維素、維生素、礦物質和抗營養(yǎng)因子等成分；采用ELISA定量檢測轉基因水稻中乳鐵蛋白的含量。1.2鐵的生物利用率研究采用體外消化/Caco-2細胞模型測定轉hLF水稻和對照親本水稻中鐵的吸收率。1.3改善大鼠缺鐵性貧血的研究選取剛斷乳雌性Wistar大鼠,體重45-55g。適應喂養(yǎng)7d后喂飼低鐵飼料4周,造成... 

【文章來源】：中國疾病預防控制中心北京市

【文章頁數(shù)】：155 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

轉HLF基因PCR鑒定結果

2結果2.1 rhLF的提取純化、Westernb lot和分子量鑒定從轉基因水稻中經(jīng)硫酸銨分級沉淀、弱陽離子交換層析、分子蹄層析及膜包脫鹽濃縮后，可獲得較高純度的rhLF (見圖2-1 )。采用此種方法提取和純化rhLF三次，采用Bradford法測定蛋白總量，用Bandscan5.0分析目的蛋白純度，結果顯示：純度分別為88.0%,93%和90%,平均純度約90%;蛋白冋收率分別是53.775，57.89%，55.01%,平均回收率約為55.55%。為進一步確定rhLF的表達，對純化后的蛋白樣品進行westerblot鑒定，加入焚光二抗經(jīng)紅外激光成像后，可看到明顯的特異印跡條帶（見圖2-2)。根據(jù)條帶位置顯示，rhLF的分子量約為79 kDa。MALDI-TOF/TOF質譜儀分析的結果進一步顯示，rhLF的精確分子量為78642.8，約為79 KDa (見圖2-3)。

在所涉及的11個時間序列為5、10、15、20、30、45、60、卯和120mi然后各管中加入5 yL5X SDS-AGE蛋白上樣緩沖液，并于100?加熱5min，溫冷卻，5000r/rniti離心3min,取15tiL上樣，將各時間點樣品中的蛋白通SDS-AGE電泳檢測。分離膠濃度為12%,考馬斯亮蘭染色，電泳結果由掃描記錄，并進行分析。2結果2. 1 rhLF在模擬胃液中的穩(wěn)定性大豆胰蛋白酶抑制劑和rhLF蛋白在模擬胃液中的穩(wěn)定性分別見圖2-162-17，SDS-PAGE凝膠電泳結果顯示：大豆胰蛋白酶抑制劑在模擬胃液的Os，1530s, 60s，2m, 4m，8m, 15m, 30m 和 60 min 內(nèi)均沒有降解；rhLF 蛋白在 15s 有降解，但降解不完全，30s內(nèi)則完全降解。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]轉高賴氨酸基因、轉人乳鐵蛋白基因水稻的食用安全性評價與轉豇豆胰蛋白酶抑制劑水稻的外源蛋白表達純化[D]. 胡貽椿.中國疾病預防控制中心 2010
[2]基因工程技術提高稻米賴氨酸含量[D]. 劉巧泉.揚州大學 2002

碩士論文
[1]轉人乳鐵蛋白基因牛奶粉食用安全性評價[D]. 王洋.天津醫(yī)科大學 2011



本文編號：2946233