發(fā)布時間：2020-11-03 19:57

　　 雞蛋蛋清是食源性多肽的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)來源,目前已證實(shí)蛋清肽具有抗血栓、抗炎、抗氧化、抗病毒等多種生物學(xué)活性,但其在促細(xì)胞遷移和皮膚創(chuàng)面愈合方面的研究較少。本文以蛋清濃縮粉為原料,通過酶解、超濾、葡聚糖凝膠層析和LC-MS等技術(shù),分離純化得到一系列蛋清小肽,并通過細(xì)胞遷移評價技術(shù)和動物實(shí)驗(yàn),系統(tǒng)研究這些蛋清源小肽的促皮膚細(xì)胞遷移和小鼠創(chuàng)面愈合活性。結(jié)論如下:我們采用Alcalase堿性蛋白酶和復(fù)合風(fēng)味蛋白酶,通過分步酶解,獲得蛋清蛋白粗酶解液。將粗酶解液通過超濾系統(tǒng),經(jīng)由四種不同分子量大小孔徑的濾膜進(jìn)行分離,保留分子量小于1 kDa的超濾液。利用人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT為細(xì)胞模型,通過劃痕愈傷實(shí)驗(yàn)證實(shí)該小分子量超濾液具有促進(jìn)細(xì)胞遷移的能力。我們進(jìn)一步通過葡聚糖凝膠層析柱分離超濾液,得到四個蛋清肽組分。將這些組分命名為S1、S2、S3、S4。通過transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)篩選出S2組分具有較好的促細(xì)胞遷移能力。我們利用LC-MS技術(shù)對S2組分中的多肽序列進(jìn)行分析,確定了22條高豐度小分子肽序列。我們在這22條小分子肽中隨機(jī)選取了6條,采用半合成法進(jìn)行合成,并考察了這些小分子肽對HaCaT細(xì)胞遷移和增殖能力的影響。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩條六肽LAYEER和LRDILN對HaCaT細(xì)胞具有較好的促遷移活性,其中LRDILN活性更為顯著。我們進(jìn)一步通過小鼠皮膚創(chuàng)面愈合實(shí)驗(yàn)考察了LRDILN對小鼠創(chuàng)面愈合過程的影響。我們在小鼠的背部構(gòu)建一個直徑7 mm的圓形傷口模型,將LRDILN溶解于生理鹽水對傷口部位滴加給藥。給藥十天后,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示給藥組傷口愈合速度明顯快于對照組。我們分別在第0,4,8,10天取傷口邊緣組織進(jìn)行HE染色,病理切片結(jié)果提示傷口愈合過程中LRDILN對傷口與正常組織交界部位細(xì)胞成分具有積極影響。本研究創(chuàng)新性地初步探明了蛋清源小肽LRDILN可促進(jìn)HaCaT細(xì)胞遷移,加速小鼠皮膚創(chuàng)面愈合進(jìn)程,為蛋清源小肽在促傷口愈合方面的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R151
【部分圖文】：

小分子蛋清肽對HaCaT細(xì)胞遷移能力的影響（劃痕愈傷實(shí)驗(yàn)）

小分子蛋清肽對HaCaT細(xì)胞遷移能力的影響（細(xì)胞小室遷移實(shí)驗(yàn)）

SephadexG-15分離層析組分對HaCaT細(xì)胞遷移能力的影響（細(xì)胞小室
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本文編號：2869032